Mestrado em Biotecnologia

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Navegando Mestrado em Biotecnologia por Orientador(a) "Luiz, Jaine Honorata Hortolan"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação química e biológica dos extratos acetato de etila obtidos a partir do co- cultivo dos fungos Lasiodiplodia sp. e Preussia africana
    (Universidade Federal de Alfenas, 2022-11-25) Carletto, Lucilene Bento; Luiz, Jaine Honorata Hortolan; Hirata, Daniela Battaglia; Silva, Eliane De Oliveira
    Os fungos endofíticos, caracterizados por constituírem uma classe de microrganismos que podem residir nos tecidos internos das plantas sem causar danos aos seus hospedeiros, produzem um grande número de substâncias bioativas. O co-cultivo, técnica usada para a produção de substâncias naturais ou para ativar clusters de genes silenciosos responsáveis pela biossíntese de metabólitos secundários, vem sendo amplamente utilizado para que sejam obtidos resultados promissores na obtenção de novas moléculas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi realizar o co-cultivo de fungos endofíticos isolado das folhas de Handroanthus impetiginosus para que esses fungos fossem capazes de produzir metabólitos secundários inéditos e com atividade biológica pronunciada. Para a realização deste trabalho, além de serem cultivados isoladamente em meio padrão Czapek, os fungos Lasiodiplodia sp. e Preussia africana, foram cultivados juntos, em meio liquido, tanto em modo estático como em modo agitado. Os extratos orgânicos acetato de etila, após evaporação do solvente, foram avaliados quanto ao seu potencial antimicrobiano e antioxidante. O perfil químico foi avaliado por cromatografia em camada delgada e também por ressonância magnética nuclear. Os melhores resultados obtidos para o ensaio de concentração inibitória mínima (CIM) e de concentração microbicida mínima (CMM) foram para os extratos do co-cultivo dos fungos Lasiodiplodia + Preussia em meio agitado em 7 dias, e cultivos únicos de Preussia em meio agitado, ambos, com valores de CIM entre 200-400 µg mL -1 frente ao patógeno Staphylococcus aureus. Em ensaios de atividade antioxidante o extrato puro de Preussia apresentou alto índice de atividade antioxidante quando avaliado em análises de DPPH, fenólicos totais e FRAP. Para o co-cultivo foi demonstrado atividade antioxidante forte para o extrato das co-culturas de Lasiodiplodia + Preussia em meio estático e Lasiodiplodia + Preussia em meio agitado em 7 dias, em ensaios de DPPH e fenólico totais. Os resultados de FRAP para cultura mista Lasiodiplodia + Preussia em meio agitado em 15 dias, apresentaram maior atividade antioxidante em relação as demais. Assim, os co-cultivos de microrganismos podem, além de melhorar o rendimento de substâncias bioativas, contribuir com o potencial antimicrobiano e aumentar a atividade antioxidante dos extratos.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Otimização das condições de cultivo submerso do fungo Lasiodiplodia sp. para produção de extratos com atividade antimicrobiana
    (Universidade Federal de Alfenas, 2021-08-20) Moreira, Dajara Moana Barbosa; Luiz, Jaine Honorata Hortolan; Hirata, Daniela Battaglia; Torres, Yohandra Reyes
    Pesquisas direcionadas ao descobrimento de novos agentes antimicrobianos provenientes de produtos naturais apresentam grande relevância. A crescente frequência de infecções resistentes a antibióticos demonstra claramente que novas drogas são imprescindíveis para a medicina atual. Dentre os compostos com potencial terapêutico oriundos da natureza, os metabólitos secundários sintetizados por fungos endofíticos, têm atraído a atenção de pesquisadores em todo mundo. Estudos demonstraram a capacidade dos fungos endofíticos em produzir um grande número de compostos com diferentes atividades biológicas. Neste estudo, foram avaliados os extratos acetato de etila (EtOAc) obtidos após cultivo submerso do fungo endofítico Lasiodilodia sp., os quais apresentaram atividade antimicrobiana significativa. Para determinar as melhores condições de cultivo, o fungo foi cultivado inicialmente em meio Czapek, em modo estático e agitado, e amostras do caldo de cultivo foram retiradas em diferentes períodos para avaliar a produção de extrato EtOAc e seu potencial antimicrobiano frente a linhagens ATCC de Staphylococcus aureus, Candida albicans e Escherichia coli, através de ensaios de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Microbicida Mínima (CMM). O cultivo por 12 dias, em modo estático, foi selecionado por produzir maior massa de extrato EtOAc, rico em metabólitos secundários (154mg/300mL). A Metodologia da Superfície de Resposta (MSR) foi utilizada para maximizar a produção desse extrato, sendo realizado um Delineamento de Composto Central Rotacional 23 , com seis pontos axiais e três repetições no ponto central, totalizando 17 ensaios, no qual as variáveis independentes foram glicose, sacarose, NaNO3, e a variável dependente foi a massa de extrato EtOAc, obtida após o cultivo. De acordo com o planejamento experimental realizado, as melhores condições de cultivo foram 15 g.L-1 de glicose, 24 g.L-1 sacarose e 0,85 g.L-1 de NaNO3. Foi possível aumentar a produção em massa de extrato EtOAc em 84%. A atividade antimicrobiana dos extratos mantiveram-se satisfatórias frente a S. aureus e C. albicans, sendo possível inferir que nas condições do estudo, Lasiodiplodia sp. produziu substâncias com características antimicrobianas de relevância biotecnológica.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Potencial antifúngico, toxicidade e estudos químicos de extratos obtidos da otimização do cultivo do endófito Preussia c.f. africana
    (2025-01-31) Aniceto, Hillary Ananda Gonçalves; Luiz, Jaine Honorata Hortolan; Malpass, Ana Claudia Granato; Lima, Graziela Domingues de Almeida
    Fungos endofíticos são microrganismos capazes de biossintetizar substâncias com diferentes estruturas químicas, as quais podem apresentar diferentes atividades biológicas, sendo úteis no combate a diversas doenças. As doenças infecciosas estão entre as principais causas de mortalidade e incapacidade nos seres humanos em todo o mundo, e, dentre elas, aquelas causadas por fungos patogênicos estão aumentando, principalmente, entre populações imunocomprometidas. O diagnóstico e o tratamento dessas doenças têm desafiado a ciência, devido ao desenvolvimento de resistência desses patógenos aos antifúngicos utilizados em tratamentos. Nesse sentido, os estudos com fungos endofíticos se tornam de fundamental importância. O fungo do gênero Preussia, apesar de pouco estudado, até o momento, mostrou-se promissor em biossintetizar metabólitos secundários bioativos e com atividade antifúngica. O objetivo principal deste trabalho foi realizar um planejamento de experimentos (DOE) para melhorar a produção de metabólitos pelo fungo, variando-se as fontes de carbono e o número de inóculos, para que o microrganismo produzisse substâncias bioativas em quantidades adequadas para avaliar seu potencial antimicrobiano e para futuros estudos químicos. Foi realizado um planejamento fatorial completo 23, com 3 pontos centrais e 6 pontos axiais, totalizando 17 ensaios. Após o cultivo do fungo foram obtidos extratos orgânicos clorofórmio e acetato de etila que foram avaliados quanto sua atividade antimicrobiana contra diferentes patógenos humanos, dentre eles Staphylococcus aureus e leveduras do gênero Candida. Os extratos foram avaliados quanto à presença de fenólicos totais e de flavonoides, bem como sua capacidade antioxidante frente ao sequestro de radicais DPPH. Validações de quatro experimentos foram realizadas, referentes às atividades antimicrobianas e às massas de extratos clorofórmio. Alguns extratos apresentaram atividade moderada contra S. aureus, com destaque para o ensaio 7 do extrato acetato de etila. Realizou-se um screening pelo método de difusão em ágar para avaliação de atividade contra as espécies de Candida para os 34 extratos, sendo selecionados os mais promissores por CIM. Os extratos apresentaram maior potencial contra C. albicans e C. glabrata, com concentrações inibitórias míninas (CIM) consideráveis, sendo a atividade contra C. tropicalis menos pronunciada. Os ensaios 5 e 7 em clorofórmio (CHCl₃) apresentaram atividade contra C. glabrata, com CIM entre 50 – 100 μg/mL, o ensaio 10 do CHCl₃ destacou-se por apresentar a atividade antifúngica mais promissora entre todos os extratos de CHCl₃, com CIM entre 25 - 50 μg/mL para C. albicans e C. glabrata e CIM e CMM entre 100 – 200 μg/mL contra C. tropicallis. Os ensaios (2, 4, 5, 7, e 10) em acetato de etila mostraram boa atividade contra C. glabrata, com CIMs entre 50 - 100 μg/mL. Os extratos obtidos apresentaram elevado potencial antioxidante, evidenciado pela alta capacidade de sequestro de radicais DPPH, a qual pode ser atribuída principalmente à presença de compostos fenólicos, encontrados em maior quantidade nos extratos, e em menor proporção, flavonoides. Os extratos que apresentaram melhores atividades antifúngicas foram avaliados quanto sua toxicidade contra larvas de Galleria mellonella utilizando-se uma concentração de 800 μg/mL, resultando em alta taxa de sobrevivências das larvas, o que sugere que os extratos avaliados podem ser utilizados em estudos futuros para purificação e identificação dos compostos, possivelmente, para obtenção ou desenvolvimento de novos medicamentos com atividade antifúngica e antibacteriana. Além disso, o planejamento de experimentos pode ser utilizado para maximizar a produção desses compostos, identificando as melhores condições de cultivo.