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Navegando Tese por Orientador(a) "Burger, Eva"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação do tratamento da paracoccidioidomicose experimental com uso do anti-fúngico itraconazol associado com aplicação de laser de baixa potência
    (Universidade Federal de Alfenas, 2020-03-02) Grisolia, Julianne Caravita; Burger, Eva; Caldas, Ivo Santana; Dias, Amanda Latércia Tranches; Camargo, Zoilo Pires De; Rodrigues, Anderson Messias
    A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides spp. (Pb), que requer tratamento prolongado, justificando estudos que ampliem as opções terapêuticas. O Itraconazol (Itra) é eficaz para o tratamento da PCM e requer terapia mais curta que outras drogas. A Laserterapia de Baixa Potência (LLLT) é uma aplicação nova, complementar, para o tratamento da PCM, que pode atuar melhorando aspectos inflamatórios da doença. Na presente tese, propusemos avaliar o efeito da administração simultânea da droga antifúngica Itra e da terapia complementar de LLLT em modelo experimental murino. Para tanto, utilizamos modelos experimentais distintos, nos quais primeiramente foram feitos testes em modelo “in vitro” para avaliarmos a utilização de 3 concentrações (3,10 e 50mg/Kg) de Itra, avaliando a atividade antifúngica das concentrações da droga, a toxicidade e sua ação sobre células e fungos de forma conjunta. Em seguida, utilizamos o modelo subcutâneo “air pouch”, foi feita a inoculação de P. brasiliensis (Pb18) em camundongos, e após 8 dias foram coletadas células da “air pouch”, constituídas em sua maioria de PMNs, para avaliar os efeitos do antifúngico e da laserterapia nas células provenientes da infecção subcutânea. Neste modelo, foram avaliadas a viabilidade celular, contagem diferencial de células, teor de produtos do metabolismo oxidativo do oxigênio (EROs), do nitrogênio (NO) e de proteínas, e a concentração das citocinas GM-CSF, TNF-α, INF-y, IL-10, IL-12, IL-4, IL-17 e KC (IL-8). Finalmente, empregamos a infecção com P. brasiliensis (Pb18) por via intraperitoneal para avaliação do perfil de infecção/cura após tratamento pela via oral com a concentração mais elevada de Itra (50mg/kg) por 120 dias, no qual avaliamos o perfil de imunidade humoral (produção de anticorpos IgG específicos) e imunidade celular (hipersensibilidade do tipo tardio-HTT), assim como, os efeitos do tratamento sobre órgãos como pulmões, fígado, baço e epíplon, analisando o teor de NO, de proteínas e das citocinas GM-CSF, Il-17, IL-4, IL-12 e KC (IL8). Os resultados deste modelo “in vitro” mostraram que o Itraconazol possui atividade fungicida contra uma cepa virulenta do Pb (Pb18), sem apresentar efeito tóxico sobre esplenócitos. O modelo “in vitro” permitiu concluir que o responsável pela lise do fungo foi o medicamento, sendo a concentração de 50mg/Kg mais eficiente. Desta forma, os resultados do modelo de infecção suncutâneo por “air pouch” mostraram que a LLLT possui efeitos sobre a células (PMNs) aumentando sua produção de metabólitos do oxigênio (EROs) e nitrogênio (NO), sua atividade metabólica, além de aumentar a produção de citocinas como KC, INF-y, TNF-α, IL-10, GM-CSF, e IL-4. O efeito da LLLT é atenuado pela associação ao Itra, sendo observada menor ativação celular à medida que aumentamos as concentrações do antifúngico. A associação os dois tratamentos (Itra e LLLT) resulta em menor ativação das células, verificada por menor produção de EROS e diminuição da síntese de citocinas inflamatórias, em paralelo com uma maior atividade fungicida. Estes resultados indicam que nesta situação experimental é menos necessária a ativação de células imunes para o combate ao fungo. A análise histopatológica nas “air pouch ”permitiu observar uma diminuição do número de células inflamatórias, além de melhora no perfil de cicatrização de lesão, verificando-se aumento do número de fibrócitos, em paralelo com a diminuição número de fungos. Com o aumento das concentrações do antifúngico foram observados menor o número de fungos no local de infecção, fato este que é potencializado pelo uso da LLLT. Os resultados obtidos a partir da infecção intraperitoneal com o tratamento de Itra por via oral (gavagem) mostraram que este modelo de tratamento com a concentração mais elevada do antifúngico (Itra) diminui a inflamação no epíplon, que é o órgão de choque na infecção intraperitoneal por Pb18, possivelmente por diminuir a quantidade de fungos viáveis no local da infecção.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Influência do tratamento com antifúngico e antiinflamatório na resposta granulomatosa da paracoccidiodomicose experimental murino: pesquisa de anticorpos e citocinas
    (Universidade Federal de Alfenas, 2022-06-29) Santos, Lauana Aparecida; Burger, Eva; Mendes, Rinaldo Poncio; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Dias, Amanda Latercia Tranches; Miranda, Tatiana Teixeira De
    O agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM) é o fungo termo-dimórfico Paracoccidioides spp. (Pb). A PCM é uma micose sistêmica de maior prevalência no Brasil. Acomete principalmente indivíduos do sexo masculino que podem estar ligados com o exercício de atividades rurais. Para compreender a interação deste fungo com o hospedeiro estudos utilizaram o modelo experimental murino e foi possível classificar diversas linhagens de camundongos infectados com Pb e os mecanismos que estão envolvidos na resposta imune inflamatória granulomatosa. Vale ressaltar que, a presença de granulomas caracteriza está micose. A expressão de citocinas e presença de anticorpos de vários isótipos nos locais de lesões granulomatosas ainda são pouco estudadas. Portanto, neste estudo, visou verificar a influência do tratamento através do estudo estereológico, pesquisa de anticorpos específicos dos isótipos IgM, IgG, IgG1a, IgG2a, IgG2b, citocinas IL17, KC (IL8) e GM-CSF em granulomas paracoccidioidomicóticos presentes nos órgãos de camundongos infectados com P. brasiliensis e tratados e não tratados com Itraconazol (antifúngico) e Celecoxibe (anti- inflamatório). Para isto, foi considerado ainda que, os tratamentos disponíveis são limitados nos dias atuais e o estudo de novas alternativas pode auxiliar a compreensão dos mecanismos de defesa e os processos inflamatórios agudos ou crônicos atuantes na PCM. Sendo assim, foram utilizados camundongos suíços infectados com a cepa virulenta Pb18 do P. brasiliensis. Realizou-se a necropsia e coletados baço, omento, fígado e pulmões e realizaram-se análises histológicas para verificar a arquitetura, celularidade, presença de leveduras do P. brasiliensis nas lesões granulomatosas e o remodelamento morfológico pelo método estereológico. Além disso, fez a imunolocalização de IgM, IgG, IL-17 e GM-CSF por imuno-histoquímica no omento dos animais infectados e infectados e tratados. Os resultados demonstraram que os animais que receberam tratamentos combinados tiveram menores lesões histológicas e apresentaram melhores padrões histológicos, peso, sobrevida, hipersensibilidade, produção de anticorpos, citocinas e menor número de fungos viáveis. Além disso, os resultados de imunohistoquímica mostraram que houve uma forte marcação para a presença de IgM, IgG, IL-17 e GM-CSF em diferentes estágios da infecção. A partir destes resultados, pode concluir que o tratamento combinado apresentou resultados satisfatórios tanto na fase inicial quanto tardia desta doença. Sugerindo que esta combinação terapêutica reduz a resposta inflamatória intensa nos pacientes e poderá ser utilizada como uma possível estratégia nova de tratamento.