Derivado da Licarina A como potente agente leishmanicida: efeito no potencial de membrana mitocondrial

As leishmanioses constituem um conjunto diversificado de doenças parasitárias causadas por protozoários flagelados do gênero Leishmania. As opções terapêuticas disponíveis são escassas, de alto custo e alta toxicidade, apresentam efeitos adversos graves, resistências parasitárias e recidivas. Os compostos naturais e seus derivados são considerados promissores candidatos a farmácos para inúmeras patologias. Dentre os compostos naturais com conhecida atividade leishmanicida, porém pouco estudada, está a neolignana Licarina A. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo analisar a atividade leishmanicida da Licarina A (DL01) e 17 de seus derivados em ambas as formas evolutivas de Leishmania (L.) amazonensis, bem como sua citotoxicidade e possíveis mecanismos de ação. Para tanto, formas promastigotas (10 6 células/ mL) foram tratadas com os compostos em diferentes concentrações (0,1 a 40 µg/mL) e incubadas durante 72 horas a 25 °C. Após esse período, a viabilidade celular foi avaliada pelo método da resazurina para a determinação da concentração inibitória de 50% das células (CI 50 ). A citotoxicidade foi determinada em macrófagos peritoneais murinos (10 6 células/mL) tratados com compostos em diversas concentrações (3,9 a 500 µg/mL) e incubados por 48 horas a 37 °C, 5% de CO 2 . A viabilidade celular foi determinada pelo método colorimétrico MTT [brometo de 3 (4,5-dimetiltiazol-2- il) -2,5-difeniltetrazólio] para a determinação da concentração citotóxica de 50% (CC 50 ). Adicionalmente, os compostos que apresentaram melhores índices de seletividade (IS) foram submetidos à avaliação da atividade anti-amastigota, na qual macrófagos (5x10 5 células/mL) foram infectados com formas promastigotas em fase estacionária da curva de proliferação, tratados por 48 horas com os compostos em uma escala de concentrações (0,1 a 40 µg/mL), corados com giemsa e analisados ​​ao microscópio óptico. Em seguida, o melhor IS obtido em relação às formas amastigotas foi utilizado para selecionar o composto mais promissor para o estudo de mecanismo de ação. Este foi realizado através da análise do potencial de membrana mitocondrial (ΔΨ) utilizando a sonda JC-10. Os resultados indicaram que treze dos compostos estudados apresentaram atividade contra as formas promastigotas, sendo que alguns se mostraram menos tóxicos, comparados ao composto DL01 e Anfoterina B. Os compostos DL03, DL10, DL17 e DL21 apresentaram IS superior em relação às formas promastigotas, variando entre 1,9 a 7,54. Quando submetidos à análise anti-amastigota, o composto DL21 apresentou melhor atividade entre os demais compostos testados (CI 50 = 0,45 ± 0,07 g/mL) e com maior IS, 41,1. Assim, o DL21 foi selecionado para o estudo de mecanismo de ação, juntamente com a DL01. Diante dos efeitos destes compostos sobre o ΔΨ, o DL01 o reduziu em 13,5%, enquanto o DL 21 o aumentou em 3,0%. Os resultados obtidos indicam que o composto DL21 é um promissor candidato a fármaco com ação leishmanicida. Entretanto, novos estudos são necessários para um conhecimento mais amplo de mecanismo de ação, bem como avalições in vivo da atividade e toxicidade.