Navegando por Autor "Ferreira, Eric Eduardo Alves"

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Acesso aberto (Open Access)
“Produção, purificação, imobilização e parcial caracterização da lipase de Preussia africana”
(Universidade Federal de Alfenas, 2023-10-27) Ferreira, Eric Eduardo Alves; Hirata, Daniela Battaglia; Pereira , Ernandes Benedito; Da Ros, Patrícia Caroline Molgero
O presente estudo buscou purificar uma nova lipase produzida pelo fungo endofítico Preussia africana (P. africana). As enzimas foram produzidas via cultivo submerso. Após o cultivo, o caldo foi filtrado e liofilizado para que as enzimas fossem concentradas. Utilizou-se solventes orgânicos (metanol, etanol 95%, etanol absoluto, iso-propanol e acetona), nas temperaturas de 10 e 25°C, para a precipitação das lipases, sendo observado que a acetona e o iso-propanol foram mais eficientes em precipitar as enzimas mantendo sua atividade catalítica, obtendo-se atividades específicas de 211,34 ± 0,05 e 179,50 ± 0,08 U/mg, respectivamente. Para esses solventes, uma nova etapa de precipitação adicional foi realizada, a fim de se obter uma maior atividade recuperada, variando-se a proporção do volume entre o sobrenadante resultante da primeira etapa de precipitação e a nova fase solvente e a temperatura (10 e 25 °C). Para a segunda etapa de precipitação, foi utilizada a proporção de 1:3 sobrenadante: solvente (v/v) e a temperatura de 10°C. Obteve-se para ambos os solventes um desempenho semelhante, sendo um fator de purificação de 1,89 ± 0,01 e uma atividade recuperada de 97,50% para o iso-propanol e um fator de purificação de 1,88 ± 0,01 e atividade recuperada de 96,70% para a acetona. Para a proporção de 1:2 sobrenadante: solvente (v/v) e 10 °C, para a segunda etapa de precipitação, a acetona apresentou melhor desempenho, obtendo o fator de purificação de 1,89 ± 0,01 e uma atividade recuperada de 93,45%. Após as etapas de precipitação, as enzimas foram separadas e a lipase de massa molecular próxima a 45 kDa foi purificada e caracterizada quanto ao tipo de substrato, pH e temperatura, de forma que a máxima atividade hidrolítica observada de 72,80 + 1,29 U/mL, foi obtida utilizando-se óleo de oliva como substrato, no pH entre 7 e 8 para temperatura de 37°C. As resinas butil e octil-agarose foram utilizadas no intuito de se avaliar a imobilização da lipase obtida. A resina octil-agarose apresentou um melhor rendimento de imobilização, atingindo 81,56 %, entretanto, a maior atividade recuperada enzimática foi obtida para a resina butil-agarose (6,49 %).