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Acesso aberto (Open Access)
Lipidoma e expressão gênica de oócitos obtidos de doadoras de genótipos leiteiros bos taurus, Bos indicus e Bos taurus/indicus
(Universidade Federal de Alfenas, 2022-09-28) Lopes, Asafe Costa; Nogueira, Ester Siqueira Caixeta; Paffato Junior, Valdemar Antonio; Silva, Rubia Bueno Da; Neves, Jairo Pereira; Fernandes, Carlos Antônio De Carvalho
Nos últimos anos observou-se um aumento expressivo do uso da produção in vitro de embriões (PIVE) em raças leiteiras. É conhecido que diferenças no potencial de desenvolvimento oocitário entre fêmeas de raças taurinas (Bos taurus) e zebuínas (Bos indicus) afetam consideravelmente a eficiência e a viabilidade econômica da PIVE e que o metabolismo lipídico pode estar relacionado a variações individuais no potencial de desenvolvimento oocitário, o presente estudo teve por objetivo avaliar o conteúdo e o perfil lipídico, além da expressão de genes envolvidos no metabolismo lipídico em oócitos de doadoras das raças Gir (Bos indicus), Holandesa (Bos taurus) e mestiças 1/2 Holandês x 1/2 Gir (Bos taurus/indicus). Os complexos cumulus-oócitos (COCs) foram recuperados por aspiração folicular e processados para separar os oócitos das células do cumulus. Os oócitos foram então direcionados para as seguintes análises: avaliação semi-quantitativa das gotas lipídicas citoplasmáticas através da coloração por Sudan Black B, análise do perfil lipídico através da espectrometria de massas utilizando o monitoramento de reações múltiplas (MRM) e análise da abundância do RNAm de genes envolvidos no metabolismo lipídico através da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. A concentração de triacilgliceróis, éster de colesterol, diacilglicerol, fosfatidilinositol e ceramida não variou entre as diferentes raças. Entretanto, a abundância total de fosfatidilcolina foi maior nos oócitos das doadoras Gir comparado com as Holandesas e mestiças, e a abundância de esfingomielina e fosfatidiletanolamina foi maior nos oócitos Gir comparado com as Holandesas, enquanto as mestiças não diferiram das demais raças. A análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA) mostrou que houve estratificação entre as raças considerando os lipídios de membrana, indicando que a raça teve efeito no perfil dos lipídios de membrana nos oócitos e, a ANOVA determinou que 19 espécies lipídicas foram diferentes entre as raças. O nível de RNAm da SPHK2, ACSL3 e CPT2 foi maior nos oócitos imaturos das doadoras Gir e mestiças, enquanto a abundância do RNAm da LRAT foi maior nos oócitos imaturos dos animais Gir em relação as Holandesas, tendo os oócitos dos animais mestiços uma abundância intermediária de LRAT. A expressão de ATX, CPT1B, ACADL e CD36 foi maior nos oócitos imaturos de Gir comparado com as Holandesas. Em relação aos oócitos maturados in vitro, a abundância de ATX, CPT1B e CD36 foi maior nos oócitos das vacas Gir e mestiças comparada com as Holandesas, enquanto a abundância do RNAm da LRAT e ACADL foi maior nos oócitos dos animais Gir em relação as Holandesas, tendo os oócitos dos animais mestiços uma abundância intermediária. Além disso, a expressão de SPHK1 e CPT1A também foi maior nos animais Gir em relação aos Holandeses. O perfil lipídico e transcricional pôde ser mais claramente discriminado entre os oócitos das raças puras, Gir e Holandesa. A maior concentração de lipídios de membrana nos oócitos Gir, associada à maior abundância de genes que metabolizam esses lipídios, indicam haver condições metabólicas que favoreçam a geração de mensageiros químicos importantes para o desenvolvimento do oócito nos animais Gir em relação aos Holandeses.