Navegando por Autor "Silva, Naiara Chaves"

Agora exibindo 1 - 2 de 2

Acesso aberto (Open Access)
Análise de aspartato protease (sap) como fator associado à virulência de linhagens de Candida albicans e Candida não-albicans
(Universidade Federal de Alfenas, 2013-02-15) Silva, Naiara Chaves; Dias, Amanda Latercia Tranches; Silva, Eriques Gonçalves Da; Ariosa, Marília Caixeta Franco
Candida spp. se tornaram, nas últimas décadas, importantes agentes causadores de infecções invasivas, responsáveis por altos índices de morbidade e mortalidade. Acredita-se que a aspartato protease secretada (Sap) seja um fator diretamente associado aos processos infecciosos exercendo papel determinante na patogenicidade de Candida spp. e que a exposição a concentrações subinibitórias de antifúngicos, pode aumentar a produção de Sap e selecionar isolados resistentes. Analisaram-se isolados de Candida albicans e Candida não-albicans oriundos de casos de infecção hospitalar. Avaliou-se o perfil proteico destes isolados por eletroforese SDS-PAGE. Avaliou-se, também, o perfil de sensibilidade dos isolados frente a antifúngicos de uso convencional em esquemas terapêuticos (fluconazol e anfotericina B) e a antifúngicos mais novos que ainda não fazem parte das rotinas hospitalares (voriconazol e caspofungina). Determinou-se a atividade proteolítica qualitativa e quantitativa de Sap e atividade metabólica de C. albicans e Candida não-albicans cultivados na presença e ausência de concentrações subinibitórias de fluconazol e anfotericina B. Estabeleceu-se a correlação entre os testes e por fim, avaliou-se a expressão do gene SAP2 em C. albicans ATCC 64548 e C. krusei ATCC 6258. 100% dos isolados foram sensíveis a anfotericina B, voriconazol e caspofungina e 89,9% a fluconazol. Dois isolados (7,4%) apresentaram sensibilidade dependente da dose e um (3,7%) apresentou resistência ao fluconazol. Na análise qualitativa da atividade proteolítica, 77,7% dos isolados apresentaram atividade. A maioria dos isolados de C. albicans (50%) e Candida não-albicans (32%) apresentou atividade proteolítica moderada. A adição de fluconazol ao cultivo não promoveu alterações significativas na atividade proteolítica dos isolados padrões, enquanto anfotericina B inibiu o crescimento de C. glabrata ATCC 90030 e C. krusei ATCC 6258. Na análise quantitativa, todos os isolados se apresentaram ativos, sendo que a maior atividade foi observada em Candida complexo “psilosis” 210 (100%) e a menor em C. albicans 257 (2,44%). A maioria dos isolados de C. albicans (50%) foi classificada como fracamente proteolítica, enquanto Candida não-albicans (53%) como moderadamente proteolítica. A presença de antifúngicos no cultivo alterou significativamente o percentual de degradação da maioria dos isolados. A maior diferença de percentual foi observada em C. lusitaniae 286, que na presença de ¼ da IC90 de anfotericina B aumentou 13,7x em relação à ausência do fármaco. O método quantitativo de determinação da atividade proteolítica apresentou maior sensibilidade. 63% dos isolados de C. albicans apresentaram alta atividade metabólica e 68% de Candida não-albicans, atividade moderada. A maior atividade metabólica foi observada em C. albicans 120 (61,72%) e a menor em C krusei ATCC 6258 (2,35%). A atividade metabólica da maioria dos isolados foi significativamente alterada. A maior diferença de percentual foi observada em Candida complexo “psilosis” 210, que na presença de ½ da IC50 de fluconazol apresentou redução de 8x na atividade metabólica em relação à ausência do fármaco. Houve expressão de SAP2 apenas em C. albicans ATCC 64548, que foi reduzida significativamente na presença de ¼ da IC90 de anfotericina B. A atividade de Sap pode ser considerada um fator potencial associado à virulência, uma vez que o isolado que apresentou a maior atividade apresentou sensibilidade antifúngica reduzida.
Acesso aberto (Open Access)
Expressão gênica de Candida albicans frente a diferentes concentrações de antifúngicos e antiretrovirais
(Universidade Federal de Alfenas, 2017-08-25) Silva, Naiara Chaves; Dias, Amanda Latercia Tranches; Melhem, Márcia De Souza Carvalho; Loyola, Ana Beatriz Alkimim Teixeira; Ariosa, Marília Caixeta Franco
Importantes atributos associados à virulência podem ser observados em Candida spp., tais como a expressão de genes SAP, os quais são responsáveis por regular a secreção de aspartato proteases (Sapp). Sabe-se que a exposição de Candida spp. a certas substâncias pode alterar o padrão de secreção de enzimas hidrolíticas tais como as Sapp. Essas proteases apresentam estrutura química e sítio ativo semelhante às proteases do vírus HIV, o que sugere que inibidores de proteases usados no tratamento da AIDS possam interagir com as proteases de Candida spp. e influenciar a síntese das proteases. O isolado padrão de C. albicans SC5314 e dois isolados de C. albicans provenientes de casos de infecção hospitalar, classificados como sensíveis ao fluconazol e anfotericina B no teste de sensibilidade, foram cultivados por 24 horas, 37°C, 180 rpm em caldo “Yeast Carbon Base” (YCB) suplementado com soroalbumina bovina (BSA) em diferentes condições de exposição, como a presença de fluconazol e anfotericina B em concentrações inibitórias e subinibitórias e saquinavir e pepstatina A em concentrações efetivas e subefetivas. Avaliou-se a expressão relativa dos genes SAP2, SAP4, SAP7 e SAP9 nos isolados submetidos a esses cultivos usando ACT1 como gene normalizador e os resultados foram analisados pelo método do CT comparativo (2-ΔΔCT) usando a amostra não tratada como controle. A expressão de SAP nos isolados de C. albicans foi maior na presença de concentrações inibitórias/efetivas dos antifúngicos e inibidores de proteases, sendo que, em número absolutos, a expressão desses genes foi ainda maior para os inibidores de proteases. C. albicans SC5314 foi o isolado de maior expressão de SAP e SAP7 foi o gene mais expresso nos isolados, em números absolutos. A fim de investigar a influência das substâncias ativas fez-se avaliação dos cultivos por citometria de fluxo e quantificação de ergosterol. A avaliação por citometria de fluxo não demonstrou grandes alterações de complexidade celular ou desvio de fluorescência indicativo de maior atividade de morte e a quantificação do ergosterol foi significativamente reduzida em relação ao controle apenas na presença de concentração inibitória de fluconazol. Tais resultados sugerem que não deva existir relação direta entre a influência dos antifúngicos e inibidores de proteases sobre a expressão de SAP e os padrões celulares avaliados, entretanto, uma vez que os fatores associados à virulência são correlacionados, tais situações podem influenciar positivamente a expressão dos genes no sentido de promover reposição das proteases a fim de garantir sua patogenicidade.