Mestrado em Ciências Fisiológicas

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Acesso aberto (Open Access)
Aspectos morfofisiológicos e comportamentais após inflamação induzida por LPS durante a gestação de camundongos
(Universidade Federal de Alfenas, 2011-05-06) Zavan, Bruno; Paffaro Junior, Valdemar Antonio; Capella, Marcia Alves Marques; Yamada, Áureo Tatsumi
Em muitos mamíferos, é notado um influxo de linfócitos no início da gestação, que é acompanhado por um processo de proliferação, diferenciação e migração destas células. Em camundongos estes linfócitos se distribuírem na região mesometrial de cada sítio de implantação (SIE). Estudos imunocitoquímicos indicaram que estes linfócitos são células Natural Killer, porém, sua morfologia e comportamento peculiar sugerem que elas representam uma subpopulação de NK específica do útero durante a gestação, sendo portanto denominadas células Natural Killer uterinas (uNK). A função conhecida para estas células em camundongos é a liberação de citocinas como IFN- que leva à dilatação das artérias espiraladas deciduais e manutenção da integridade decidual, contribuindo, portanto, para o desenvolvimento normal da decídua e da placenta. A infecção intra-uterina foi reconhecida como a causa primária de partos prematuros e corrobora para o desenvolvimento de leucomalácia periventricular e displasia broncopulmonar. Estudo recente em camundongos prenhes demonstrou que a injeção intra-uterina de LPS de E.coli provoca aumento da expressão de Fosfodiesterase 4B (PDE4B) e da atividade fosfodiestrase na interface materno-fetal, aumento nas concentrações de TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10 no líquido amniótico o que induz o parto prematuro e a diminuição da viabilidade fetal. É esperado que a administração de LPS promova o aumento sistêmico e central de citocinas próinflamatórias, e que o animal responda com alterações endócrinas, imunológicas e comportamentais com o fito de favorecer o restabelecimento da homeostasia. Nesse contexto, o presente trabalho buscou avaliar os efeitos comportamentais da administração de LPS em camundongos, bem como os efeitos no útero prenhe e nas células uNK desses animais por meio do estudo morfológico, citoquímico e estereológico. O estabelecimento do comportamento febril foi identificado a partir da segunda hora após a administração de LPS, e esse evento ocorreu concomitante ao estabelecimento do comportamento análogo à ansiedade. Foi possível identificar nos animais tratados o comportamento de apatia e redução na capacidade exploratória, que somados ao comportamento depressivo, estabelecido após 1 hora da aplicação do LPS, fazem parte das alterações que constituem o comportamento doentio. O tratamento provocou também alterações no ambiente uterino, de tal forma que foi possível identificar um significativo aumento de células uNK imaturas na região do miométrio dos SIE. Além disso, o tratamento levou à diminuição da quantidade de células uNK maduras e senescentes nas três regiões estudadas dos SIE concomitante ao aumento de células uNK que possuíam padrão alterado na expressão de N-actilgalactosamina nos seus grânulos e superfície. O período onde foram encontradas tais alterações acompanhou o período onde houve perda na marcação de perforina, sugerindo a ocorrência de degranulação. A imunocitoquímica demonstrou que o tratamento com LPS parece ter induzido a despolimerização dos filamentos contrateis de α-actina causando relaxamento nos vasos que irrigam o ambiente uterino.
Acesso aberto (Open Access)
Aspectos morfofisiológicos e comportamentais da gestação de camundongos após tratamento prévio com Danazol
(Universidade Federal de Alfenas, 2011-05-20) Tavares, Érika Pasqua; Paffaro Junior, Valdemar Antonio; Pereira, Grace Schenatto; Pereira, Alessandro Antônio Costa
Danazol, um andrógeno sintético, desenvolvido em 1970 para o tratamento da endometriose, tem aplicação controvérsia no pré-tratamento de mulheres com infertilidade sem causa aparente, abortos recorrentes e que seriam submetidas à fertilização com transferência de embrião. O conhecimento sobre a atuação deste medicamento sobre a incidência de células uNK, morfologia uterina e funções cognitivas após sua administração ainda são muito fragmentados e não conclusivos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar os efeitos das diferentes concentrações do danazol no comportamento de camundongos prenhes, bem como, as possíveis alterações na implantação, viabilidade, perda embrionára, morfologia do útero e incidência dos subtipos de células uNK reativos para lectina DBA. Foram utilizadas noventa e três fêmeas da linhagem Swiss, obtidas do Biotério da Universidade Federal de Alfenas, tratadas durante 14 dias por meio de gavagem com água destilada + tween 1% (grupo controle) e com água destilada + tween 1% + danazol nas concentrações de 0,75; 7,5; ou 75 mg/kg. O tratamento nos animais foi suspenso por 4 dias e após este prazo as fêmeas foram acasaladas com os machos. O dia em que foi constatada a presença do tampão vaginal foi considerado o 1° dia de gestação. Os testes comportamentais foram realizados e os animais foram sacrificados no 6º, 8º, 10º, 12º e 15º dia de gestação (ddg). Os resultados obtidos mostraram que danazol na dosagem de 0,75 mg/Kg apresentou efeito ansiogênico em camundongos e diminuiu a retenção de memória de curto prazo no 10º ddg. Na concentração de 7,5 mg/Kg provocou aumento da retenção de memória a curto prazo e estado equivalente ao depressivo. A diminuição do tempo de exploração global, à medida que a concentração do hormônio foi aumentada sugere efeito dose dependente de danazol no estabelecimento de estado de sonolência e apatia em camundongos no 10º ddg. Danazol provocou atraso no período para sucesso da cópula, no entanto, aumentou a taxa de prenhez sem reduzir o número de corpus lúteos em todas as dosagens utilizadas. Nos camundongos tratados com a dosagem 7,5 mg/Kg de danazol foram observadas, a partir do 10º ddg, muitas células grandes e de morfologia equivalente às células trofoblásticas gigantes ao redor dos vasos que nutrem a decídua e o embrião, o que sugere que está droga aumenta a invasividade do trofoblasto a partir do período médio da prenhez. Danazol na concentração de 7,5 mg/Kg provocou aumento no número de células uNK, enquanto dosagens menores (0,75 mg/Kg) e maiores (75 mg/Kg) causaram diminuição neste número, demonstrando o efeito dose dependente de danazol no número de células uNK. A análise dos diferentes subtipos de uNK no útero mostrou que danazol aumenta a migração destas células, podendo prejudicar a proliferação celular em doses elevadas e acelerar a diferenciação celular em áreas próximas ao embrião. As maiores alterações relacionadas à ansiedade e memória observadas no 10º ddg, associadas às alterações morfológicas nos sítios de implantação embrionária e aumento na proliferação de células natural killer uterinas também neste período, demonstram a integração entre sistemas nervoso, endócrino e imunológico durante a prenhez e a ação dose-dependente de danazol modulando as respostas destes sistemas.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação morfológica, citoquímica e estereológica do útero de camundongos prenhes após estresse induzido por exercício físico extenuante
(Universidade Federal de Alfenas, 2011-02-02) Rodrigues, Kamila Leite; Paffaro Junior, Valdemar Antonio; Reis, Adelina Martha; Bizinotto, Márcia Cristina
O exercício aeróbio aumenta o fluxo sanguíneo para o músculo esquelético, diminuindo esse fluxo em outros órgãos como útero e placenta o que pode prejudicar a oxigenação e nutrição do embrião. O estímulo do exercício extenuante pode ser estressor, aumentando a secreção de glicocorticóides através do eixo Hipotálamo-Hipófise-adrenal e que podem causar complicações durante a gestação, como as observadas em outras situações como o estresse alimentar e após infecção. As células Natural Killer uterinas (uNK) correspondem a maior população de leucócitos deciduais de humanos e roedores. As uNK de camundongos têm sido muito estudas por meio da citoquímica de lectina DBA (Dolichos Biflorus Agglutinin), que tem afinidade para N-acetil-D-Galactosamia expressa seletivamente nos grânulos e membrana plasmática destas células. Esta seletividade propiciou a caracterização de quatro subtipos de uNK, relacionados aos estágios de diferenciação destas células. A função mais aceita das uNK é a secreção de INF-y levando a dilatação das artérias espiraladas uterinas para manutenção da decídua e nutrição do embrião. Este estudo teve o objetivo de investigar se o exercício extenuante exerceria efeitos na implantação e integridade embrionária, bem como, no número, diferenciação, distribuição e padrão de reatividade para lectina DBA das uNK. Dez camundongos Swiss fêmeas foram mantidos sedentários (grupo 1). Outros 10 (grupo 2) foram submetidos a natação, do 1º ao 10º dia de gestação (dg), durante 60 minutos diários, dos quais os últimos 20 minutos se procederam com halter com massa de 4% do peso corporal, preso a suas caudas, em dias alternados do 1º ao 5º dg, e de 10% dessa massa do 6º ao 10º dg. Os animais do grupo 3 após prenhez, foram submetidos a natação da mesma maneira que os do grupo 2, porém passaram por um programa de treinamento de 3 semanas anterior a prenhez durante 5 dias/semana, sendo realizado 15 minutos/dia na primeira semana, aumentando gradativamente em 10 minutos/dia até 60 minutos na segunda semana e 60 minutos/dia na terceira semana. Todos os camundongos foram anestesiados e perfundidos com PFA (paraformaldeído) 4% no 10º dg. As taxas de implantação, viabilidade e reabsorção embrionárias foram avaliadas e os sítios de implantação destes animais foram coletados e embebidos em parafina para obtenção de cortes histológicos que foram analisados por lectina DBA e HE (Hematoxilina e Eosina). Foram quantificados os 4 subtipos de células uNK DBA reativos em 3 áreas da região mesometrial dos sítios de implantação. Nossos resultados mostraram que o exercício físico extenuante é capaz de causar diminuição na implantação, viabilidade embrionária e aumento na perda fetal, bem como, aumento em número e na diferenciação das células uNK, sem aparente ativação de sua citotoxicidade. O exercício realizado previamente a prenhez diminuiu estes efeitos, pois restabeleceu as taxas normais de implantação e o número total de uNK, bem como, aumentou a viabilidade e diminuiu a perda embrionária, contudo sem impedir completamente os efeitos deletérios do exercício na gestação. Nossos resultados indicam que esse modelo de estresse poderá ser útil para estudos futuros da investigação dos mecanismos neuroimunoendócrinos, envolvidos com parto prematuro e aborto causado por fatores estressores muitas vezes desconhecidos.
Acesso aberto (Open Access)
Efeito do extrato hidroalcóolico de Cassia angustifolia na gestação de camundongos
(Universidade Federal de Alfenas, 2012-08-17) Galdino, Daniel; Paffaro Junior, Valdemar Antonio; Szawka, Rapahel Escorsim; Ventura, Renato Rizo
A Cassia Angustifolia (Sene) é considerada um planta medicinal indicada principalmente para fins purgativos e constipação intestinal, no entanto, destaca-se também pelo seu uso como abortiva e emenogoga. Plantas medicinais tardicionalmente usadas para induzir o aborto são usadas em altas doses, podendo causar efeitos tóxicos e prejudiciais ao feto e ao corpo da mulher. O principal constituinte químico da CAssia angustifolia é a antraquinonas, onde o metabólico secundário chamado de diantrona (Senosídeos A a F) e também outros compostos como glicosideos, naftalênicos e flavonoides. Estudos recentes destacam que esses compostos antraquinônicos aumentam o influxo de sangue para o útero e seus anexos, provocam intoxicação placentária, aumentando assim o risco de perda fetalocasionando principalmente por disfunção do fosforilação oxidativa mitocondrial. Na interface - materno fetal existem células trofoblásticas gigantes (CTGs) que são de grande relevância que são de grande relevância para a manutenção do equilíbrio existente entre o feto e a gestante. Elas . Elas. Elas se localizam entre os tecidos maternos e fetais durante todo o período se localizam entre os tecidos maternos e fetais durante todo o período. Elas se localizam entre os tecidos maternos e fetais durante todo o período gestacional, adquirindo funções de invasidade, hematotrófico e fagocitário. Existem também zx células natural Killer uterinas (uNK) cuja principal função é a liberação de citocinas com IFN-Y que leva à dilatação ds artérias espiraladas deciduais e manutennção de integridade decidual, contribuindo, portanto, para o desenvolvimento normal da decídua e da placenta. Neste contexto, o presente trabalho buscou avaliar os possiveis efeitos da administração do extrto hidroalcoolico de Cassi angustifolia (Sene) em diferentes períodos da gestação de camundongos, tanto no organismo materno como cno concepto, bem como os efeitos comportamentaios eos efeitos nas células uNK e CTGs desses animais por meio dos estudo morfológico, citoquímico e estereológicos. Realizou-se também o perfil cromatográfico a fim de averiguar os principais constituites quimicos do extrato. O tratamento com extrato provocou alterações morfologicas bastante evidentes, de tal forma que foi possível identificar a presença de focos hemorrágicos e reabsorções uterinas. Verificamos que o CTGs se localizavam em meio ao infiltardo sanguineo, ou até mesmo ao redor de um inicio de necrose, exercendo assim um papel fagocitário frente à aitividade inflamatória e remodelação tecidual. As células NKu apresentaram um aumento significativo a região endometrial mais distante do embrião. Esses achados sugerem que existe uma cinética no proecesso de perda e reabsorção embrionária nos naimais tratados durante o prenhez que se inicia com o processo hemorrágico, morte e reabsorção embronária e que os senosídeos A e pode estar associado a estes efeitos. Portanto o uso de Cassia angustifolia durante os periodos de desenvolvimento embrionário apresenta um grande risco para a mãe e para o feto
Acesso aberto (Open Access)
Influência dos glicocorticoides no comportamento doentio induzido pelo LPS de E. coli em camundongos prenhes
(Universidade Federal de Alfenas, 2015-02-26) Fonseca, Wesley Fernandes; Paffaro Junior, Valdemar Antonio; Felício, Luciano Freitas; Silva, Marcelo Lourenço Da
A administração do LPS de Escheria coli gera resposta imunológica e endócrina, como a produção de citocinas pró-inflamatórias, produção de prostaglandinas. Além disso, a endotoxemia promove mudanças neuro-endócrinas, como alterações no metabolismo da noradrenalina e serotonina no cérebro além da ativação do eixo HPA provocando comportamento doentio evidenciado por quadros de redução da capacidade exploratória e locomotora, anorexia, pirexia, anedonia, sonolência, redução do comportamento social e sexual, comportamento semelhante à ansiedade e depressão. Já foi demonstrado na literatura que endotoxemia é capaz de provocar hipotermia em animais prenhes além de apresentar significativa taxa de aborto e falhas gestacionais. Além disso, foi evidenciado também que fêmeas gestantes também apresentam o comportamento doentio diante da administração do LPS com mudanças nos componentes da interface materno-fetal importantes para o estabelecimento da homeostase uterina. Como a ativação do eixo HPA é uma das respostas mais proeminentes da endotoxemia, o presente estudo investigou a interferência de glicocorticoides no comportamento doentio em fêmeas prenhes. Para tanto, foi utilizado glicocorticoide exógeno, a dexametasona, bem como, inibidores da síntese de glicocorticoide, metirapona e mifepristone. A metirapona é um inibidor da enzima 11-β-hidroxilase, a qual inibe o passo final de precursores da corticosterona. A mifepristone é um antagonista de receptores de glicocorticoide e ligante de receptores de progesterona. Fêmeas de camundongos SWISS no 10º dia de gestação foram pré-tratadas com as referidas drogas, 30 minutos antes do tratamento com LPS. Após duas horas, a temperatura retal foi aferida e foram realizados testes comportamentais a fim de investigar comportamentos semelhante à ansiedade, depressão, além de observar a capacidade exploratória e retenção de informações a curto prazo. A viabilidade gestacional também foi averiguada observando, para isso, o número de filhotes nascidos por ninhada. Foi observado que o tratamento com LPS provocou hipotermia nos animais prenhes sendo que o pré-tratamento com dexametasona foi o único capaz de evitar tal efeito através da redução da síntese de TNF-α. Tais achados fornecem indícios para o uso da dexametasona como antipirético em quadros de endotoxemia durante a gestação. Além disso, foi observado que o tratamento com LPS, independente do pré-tratamento utilizado, provocou um comportamento doentio evidenciado pela redução da capacidade exploratória e locomotora nos animais prenhes submetidos aos testes comportamentais. Os presentes achados comportamentais vão de encontro com a vasta literatura, indicando, adicionalmente, que o comportamento doentio é dependente de citocina pró-inflamatória e que o pré-tratamento com glicocorticoide ou inibidores de sua síntese não são capazes de prevenir o comportamento doentio. O pré-tratamento com metirapona foi o único capaz de evitar o aborto causado pelo LPS através da elevação dos níveis plasmáticos de progesterona, a qual, por sua vez, protege o feto contra ataques imunológicos maternos durante a gestação e assegura o parto. Desse modo, a metirapona pode ser usada a fim de prevenir abortos imunológicos provocados pela administração do LPS. Tais achados são significativos a fim de evitar perdas gestacionais provocadas pela endotoxemia evidenciando a metirapona como importante agente farmacológico. O pré-tratamento com mifepristone, com ou sem exposição ao LPS, provocou perda total da gestação. Tais achados vão de encontro com a literatura científica e caracterizam a mifepristone como potente agente abortivo capaz de interromper a gestação mesmo quando administrado após o período de implantação embrionária.

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