Mestrado em Biociências Aplicadas à Saúde

URI Permanente para esta coleçãohttps://repositorio.unifal-mg.edu.br/handle/123456789/2643

Navegar

Navegando Mestrado em Biociências Aplicadas à Saúde por Orientador(a) "Coelho, Luiz Felipe Leomil"

Filtrar resultados informando as primeiras letras
Agora exibindo 1 - 5 de 5
  • Imagem de Miniatura
    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Análise do perfil global de metilação do DNA e do promotor do fator de necrose tumoral alfa e do interferon gama em pacientes infectados pelo Dengue virus
    (Universidade Federal de Alfenas, 2015-08-03) Gomes, Alessandra Vilas Boas Terra; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Abrahão, Jônatas Santos; Souza, Raquel Lopes Martins
    A dengue é uma infecção viral sistêmica, autolimitada, transmitida para os humanos através da picada de mosquitos fêmeas infectadas do gênero Aedes sp. Trata-se de uma doença com grandes impactos na economia e na saúde pública, e estima-se que entre 50 a 100 milhões novas infecções ocorram anualmente em mais de 100 países. A dengue é causada pelo Dengue virus (DENV), um vírus pertencente à família Flaviviridae, com genoma composto de uma única molécula de RNA, fita simples com polaridade positiva. A infecção pelo DENV pode ser assintomática ou apresentar diferentes manifestações clínicas, como febre do dengue (FD), febre hemorrágica do dengue (FHD) e Síndrome do Choque do dengue (SCD). Dados da literatura indicam que algumas infecções virais podem causar alterações epigenéticas em seus hospedeiros, principalmente a metilação do DNA. Assim, o propósito deste trabalho foi investigar a influência da infecção pelo DENV no perfil global de metilação dos pacientes, através da técnica de MethELISA, e analisar o padrão de metilação no promotor dos genes fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interferon gama (IFN-γ). Os resultados obtidos indicam uma tendência na diminuição do percentual relativo de metilação após a infecção pelo DENV, sugerindo uma influência da infecção viral nos mecanismos epigenéticos do hospedeiro. Observou-se também uma maior taxa de desmetilação do promotor do TNF-α dos pacientes infectados em relação ao grupo controle. Em relação ao IFN-γ, não foi observada diferença no padrão de metilação do gene entre os dois grupos analisados. A meta-análise de microarranjos de DNA obtidos de pacientes infectados pelo DENV indica um aumento na expressão dos genes da Timina DNA Glicosilase (TDG) e das DNA Metiltransferases 1 e 3 (DNMT1 e DNMT3) nos pacientes infectados. Estes dados sugerem que o DENV é capaz de interferir com os mecanismos epigenéticos do hospedeiro.
  • Imagem de Miniatura
    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação da resposta imunológica humoral em camundongos Swiss imunizados com Nanopartículas de albumina sérica bovina associadas aos antígenos totais de Pseudomonas aeruginosa
    (Universidade Federal de Alfenas, 2014-08-22) Rodrigues, Naiara Ferreira; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Abrahão, Jônatas Santos; Dias, Amanda Latércia Tranches
    Pseudomonas aeruginosa é um importante patógeno humano oportunista que causa graves infecções em pacientes imunocomprometidos e em pacientes portadores de fibrose cística (FC). O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de nanopartículas de albumina sérica bovina associadas aos antígenos totais de P. aeruginosa em proteger camundongos do desafio pela via nasal por este patógeno. Camundongos foram imunizados pela via subcutânea usando antígenos totais de P. aeruginosa, nanopartículas vazias ou nanopartículas associadas aos antígenos totais de P. aeruginosa nos dias 0, 7 e 14. A produção de anticorpos IgG total e os subtipos IgG1 e IgG2a foram avaliados por ELISA. Os camundongos imunizados foram desafiados com P. aeruginosa e os pulmões foram coletados para estudos histopatológicos e detecção da bactéria no pulmão. Nossos resultados mostram que camundongos imunizados com nanopartículas associadas aos antígenos totais de P. aeruginosa produziram altos títulos de anticorpos IgG1 anti-P. aeruginosa e títulos significativos de IgG2a. Os dados também mostram que camundongos imunizados com nanopartículas associadas aos antígenos totais de P. aeruginosa e desafiados com a bactéria apresentaram diminuição dos sinais inflamatórios, com uma redução significativa na intensidade e concentração de células inflamatórias, diminuição da hemorragia, sinais de edema e hiperemia nos pulmões se comparado aos outros grupos. A bactéria não foi detectada nos pulmões dos animais imunizados e infectados nos tempos analisados. Portanto, essa formulação é capaz de induzir uma resposta protetora nos animais infectados, sendo portanto, uma promissora plataforma para vacinas contra P. aeruginosa.
  • Imagem de Miniatura
    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação do potencial vacinal de três peptídeos sintéticos, conservados e tetravalentes derivados dos domínios I e II da proteína do envelope do dengue virus.
    (Universidade Federal de Alfenas, 2015-08-03) Rocha, Raissa Prado; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Abrahão, Jônatas Santos; Almeida, Leonardo Augusto De
    A dengue é uma arbovirose que tem se destacado nos últimos anos como um grave problema de saúde pública no Brasil. O Dengue virus (DENV) pertence à família Flaviviridae, gênero Flavivirus e seu genoma é composto de uma fita RNA, com polaridade positiva. Atualmente são conhecidos cinco sorotipos de DENV, os quais são geneticamente e antigenicamente distintos. O desenvolvimento de uma vacina que confira imunidade simultânea, eficiente e duradoura, contra os cinco sorotipos do DENV é considerado prioritário diante a magnitude do problema. Desta forma, neste estudo foi avaliado o potencial vacinal de três peptídeos (PEP01, PEP02 e PEP03) tetravalentes, sintéticos e conservados derivados da proteína do envelope do DENV. Um ensaio de ELISA indireto revelou a reatividade de amostras de soros humanos IgM/IgG positivos para dengue contra os peptídeos sintéticos. Ensaios de imunização em modelo murino mostraram que estes peptídeos foram capazes de induzir a produção de anticorpos específicos. Entretanto, os ensaios de neutralização mostraram ausência ou um baixo título de anticorpos neutralizantes. As células do baço derivadas de camundongos imunizados com os peptídeos mostraram uma alta produção de IL-10 e uma redução da produção do TNF-α e IFN-γ após a infecção com todos os sorotipos DENV quando comparado ao controle positivo. Em adição, células provenientes de camundongos imunizados com os peptídeos PEP02 e PEP03 apresentaram in vitro uma redução significativa da viabilidade celular após a infecção com os quatro sorotipos de DENV. A fim de se buscar um candidato vacinal para a dengue, foi expressa em sistema procarioto uma proteína recombinante (PEPDENV) que contém as sequências de PEP01, PEP02 e PEP03 fusionadas a uma sequência específica capaz de induzir de anticorpos neutralizantes. A imunização com a proteína PEPDENV revelou a imunogenicidade desta proteína ao induzir alta produção de anticorpos IgG1 em modelo murino, porém os soros não apresentaram atividade de neutralização da partícula viral. Ensaios imunoenzimáticos utilizando os peptídeos como substratos mostraram que os soros dos animais imunizados com PEPDENV tem capacidade de reconhecer os peptídeos, apresentando especialmente uma alta reatividade com o PEP03. Esses resultados sugerem que a ausência de atividade neutralizante dos anticorpos ocorreu pelo fato de que a resposta imune à proteína PEPDENV está mais direcionada para PEP03 do que para outras regiões da molécula, confirmando a imunogenicidade deste peptídeo. No entanto, mais estudos que visam modificar a sequência peptídica serão necessários para induzirem a produção de uma resposta imune eficaz contra todos os quatro sorotipos de DENV e também para melhorar a imunogenicidade deste canditatos vacinais.
  • Imagem de Miniatura
    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Caracterização molecular e análise filogenética de Dengue virus 1 isolado em Alfenas, Minas Gerais
    (Universidade Federal de Alfenas, 2014-01-17) Fagundes, Luís Gustavo Da Silva; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Silva, Breno De Melo; Colombo, Fábio Antônio
    A dengue é uma arbovirose transmitida ao ser humano, através da picada de fêmeas do mosquito Aedes aegypti infectadas. A doença é endêmica em 112 países da África, das Américas, do Mediterrâneo, do Sudeste Asiático e do Pacífico Oeste. Conforme Estimativas da Organização Mundial de Saúde, 40% da população mundial vive em áreas de risco para dengue. A caracterização molecular contribui para compreender e acompanhar a diversidade genética do Dengue virus, assim como, a variabilidade da virulência dos isolados virais circulantes. Em Minas Gerais, circulam os quatro sorotipos do Dengue virus, porém poucos estudos vêm sendo realizados sobre sua dinâmica populacional. O isolado BR/Alfenas/2012, analisado neste estudo, foi obtido a partir da amostra de soro de um paciente com febre hemorrágica da dengue. A região codificadora da proteína E e NS5 foram amplificadas por RT-PCR e utilizadas nos estudos filogenéticos. As análises agruparam este isolado no genótipo V, linhagem L1, próxima a isolados provenientes do Rio de Janeiro, do Norte do Brasil e outros isolados da Venezuela e Colômbia. A análise filogeográfica forneceu evidências que o isolado BR/Alfenas/2012 é descendente direto de amostras do Rio de Janeiro de 2010 e 2011, tendo como ancestral comum o isolado DENV-1/VE/BID-V2468/2008, proveniente da Venezuela. A análise da região codificadora da proteína E, mostrou que o isolado BR/Alfenas/2012 apresenta uma diferença de 14 bases em relação aos outros isolados presentes no mesmo genótipo e linhagem, gerando desta forma, mutações sinônimas e não-sinônimas. Para caracterizar o potencial virulento desta amostra, camundongos Swiss foram infectados por via intraperitoneal com 1 x 104 unidades formadoras de placas. Sete dias pós-infecção os animais foram sacrificados e o fígado retirado para estudo histopatológico, onde os animais infectados apresentaram infiltrados inflamatórios, esteatose hepática, além de edema, hemorragia e pontos de necrose focais. Este é o primeiro relato do isolamento de DENV-1, no Sul do estado de Minas Gerais, o que possibilita iniciar uma inferência sobre a distribuição genética e diversidade desse vírus, nesta região.
  • Imagem de Miniatura
    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Reatividade sorológica de três peptídeos sintéticos derivados dos domínios I e II da proteína do envelope do Dengue virus em amostras de soro de pacientes com suspeita de dengue
    (Universidade Federal de Alfenas, 2014-01-17) Costa, Lauro Cesar Felipe Da; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Drumond, Betânia Paiva; Chavasco, Jorge Kleber
    A dengue é um dos principais problemas de saúde publica do mundo, especialmente nas regiões tropicais e subtropicais. Apesar da magnitude do problema, ainda existem limitações relacionadas ao diagnóstico, devido à presença de resultados falsos negativos, muitas vezes apresentados nos laudos laboratoriais. Estudos com a proteína do envelope são extremamente importantes para o desenvolvimento de novas vacinas e testes de diagnóstico. Os métodos sorológicos são importantes para o diagnóstico das infecções por dengue, entre eles, o imunoensaio enzimático para detecção de IgM contra o vírus da dengue. Neste estudo, 82 amostras de soro de pacientes com suspeita de dengue foram classificadas como positivas ou negativas utilizando o kit comercial Panbio ELISA de Captura Dengue IgM. O desempenho do ensaio do kit comercial foi comparado com os novos ensaios ELISA indireto usando três peptídeos sintéticos derivados da proteína E como substrato. De um total de 82 amostras de soro, (52,4%) foram positivas pelo kit comercial Panbio Dengue IgM ELISA de Captura, 18 (21,9%) apresentaram reatividade contra Pep1, 40 (48,7%) contra o Pep2 e 66 (80,4%) contra Pep3. Entre as amostras de soro classificadas como positivas pelo kit comercial (42), 11 (26%), também foram classificadas como positivas usando o peptídeo Pep1. Vinte e duas (52,3%), utilizando o Pep2 e 40 (95,23%) utilizando Pep3. Entre as amostras classificadas como negativas por meio do kit comercial (40), 28 (70%) foram classificadas como negativas usando como substrato o Pep1, vinte 20 (50%) utilizando como substrato o Pep2 e 13 (32,5%), utilizando como substrato Pep3. Os resultados demonstram que os peptídeos sintéticos podem ter potencial biotecnológico para o desenvolvimento de novas vacinas, tratamentos e testes de diagnósticos.