Mestrado em Ciências Farmacêuticas

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Navegando Mestrado em Ciências Farmacêuticas por Orientador(a) "Gouvêa, Cibele Marli Cação Paiva"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação do efeito da membrana de látex de Hevea brasiliensis no reparo de defeito da parede abdominal de rato
    (Universidade Federal de Alfenas, 2007-02-15) Ferreira, Pablo Gomes; Gouvêa, Cibele Marli Cação Paiva; Araújo, Heloisa Sobreiro Selistre De; Fiorine, João Evangelista
    A hérnia incisional (HI) é uma das complicações tardias das laparotomias, podendo acometer até 20% dos pacientes operados. A utilização de próteses representou um avanço sem precedentes no reparo da HI. Contudo, não há ainda tratamento ideal para o reparo e prevenção desse mal. A membrana de látex da seringueira demonstrou atividade cicatrizante e angiogênica em estudos in vitro e in vivo. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da membrana de látex sobre o reparo da parede abdominal lesada de ratos. Foram utilizados ratos machos Wistar com peso de 340 ± 20 g, nos quais foi induzido um defeito na parede abdominal de 1 x 2 cm, tendo a linha alba ao centro. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais: Controle (sem reparo) e Látex (reparo com a membrana) e submetidos à eutanásia aos 3, 5, 7 e 28 dias após a indução do defeito. Os fragmentos da parede abdominal foram retirados, divididos em duas partes e utilizados para análise histológica e bioquímica. A análise histológica revelou que o látex induziu a proliferação de vasos sangüíneos, o aumento de fibras musculares novas e a regeneração tecidual. Observou-se ainda o aumento da densidade de fibroblastos e deposição de colágeno, o que é importante para determinar o aumento da resistência a forças tensoras no tecido cicatricial, evitando a deiscência da ferida e a instalação da HI. Houve aumento gradual de deposição e organização das fibras colágenas durante o período de estudo. O látex induziu ainda a expressão dos fatores de crescimento celular, FGF-2 e TGFb; a diminuição da expressão de IGF e PDGF e não alterou a expressão de TGFa. A regeneração tecidual requer a influência de fatores de crescimento celular e uma seqüência de eventos celulares, que resultam na regulação celular, com proliferação, sobrevivência e diferenciação. Assim, a modulação de fatores de crescimento pela membrana de látex, parece ter contribuído positivamente para a regeneração do defeito da parede abdominal. Conclui-se que a membrana de látex da seringueira, quando usada para reconstrução da parede abdominal de ratos, permite a regeneração tecidual, a formação de tecido conjuntivo fibroso de reparação, podendo ser utilizada efetivamente na hernioplastia.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Efeito de extratos de folhas de barbatimão sobre o dano oxidativo e a genotoxicidade induzida por ciclofosfamida
    (Universidade Federal de Alfenas, 2008-02-19) Santos Filho, Plínio Rodrigues Dos; Gouvêa, Cibele Marli Cação Paiva; Oliveira, Alaíde Braga De; Marques, Marcos José
    O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito antioxidante e antigenotóxico de extratos de folhas de Styphnodendron adstringens (“barbatimão”). Foram obtidos o extrato aquoso (AEB), a fração aquosa (WFB) e o extrato etanólico (EEB) de folhas de barbatimão. Foram analisadas as atividades antioxidante in vitro e in vivo e o efeito dos extratos contra o agente genotóxico, ciclofosfamida (CP). O conteúdo de compostos fenólicos variou de 23,93 a 34,94%, os flavonóides de 3,63 a 5,02% e as proantocianidinas de 23,32 a 35,4 mM. Todos os extratos testados exibiram atividade antioxidante. A capacidade antioxidante total dos extratos foi de: 147,85±12,68, 124,36 ± 7,18 e 148,64 ± 8,41 mg ácido ascórbico/g extrato, para o AEB, WFB e EEB respectivamente. A atividade seqüestrante de DPPH dos extratos foi dependente da concentração e a atividade máxima foi obtida com 62 μg/mL dos extratos. Estes apresentaram capacidade similar ao ácido ascórbico e maior que o BHT para reduzir o Fe3+ e esta atividade foi também dependente da concentração. O poder redutor máximo foi obtido com 250 mg/mL dos extratos. Nos ensaios in vivo o AEB e EEB foram mais eficientes no cérebro, reduzindo a formação de TBARS, enquanto o WFB foi mais ativo no fígado, diminuindo a oxidação de proteínas. Em relação à fragmentação do DNA, foi visto que a CP induziu apoptose, confirmada pelo padrão de DNA escada. O AEB não produziu apoptose, mas também não protegeu as células contra o efeito da CP. O WFB foi antigenotóxico, pois não induziu apoptose e protegeu as células dos efeitos apoptóticos da CP. O EEB induziu necrose, evidenciada pela intensa lesão do DNA (arraste). Em conclusão, todos os extratos apresentaram atividade antioxidante e o WFB é antigenotóxico.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Indução de morte em células MCF-7 e MDA-MB-435 tratadas com fração isolada do extrato de folhas de barbatimão
    (Universidade Federal de Alfenas, 2010-02-25) Sabino, Ana Paula De Lima; Gouvêa, Cibele Marli Cação Paiva; Fiorini, João Evangelista; Chavasco, Jorge Kleber
    O presente trabalho teve como objetivo investigar o tipo de morte induzida nas linhagens de carcinoma mamário humano MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-), pela fração isolada do extrato de folhas de barbatimão. As folhas de Stryphnodendron adstringens (Martius) Coville (Fabaceae) foram coletadas, secas e utilizadas para o preparo do extrato acetônico, que foi particionado com acetato de etila. A fração aquosa remanescente foi liofilizada e fracionada por cromatografia em Sephadex LH 20. As frações coletadas foram submetidas à cromatografia em camada delgada e a fração eluída com metanol a 100% foi utilizada nos experimentos, por apresentar o maior conteúdo de proantocianidinas. A análise por HPLC permitiu verificar que a fração isolada contem procianidina dimérica B1, epigalocatequina-3-O-galato e ácido gálico. As células de adenocarcinoma mamário MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-) foram tratadas por 24 h com diferentes concentrações da fração (5 – 160 μg/mL) e com ciclofosfamida a 550 μg/mL. O tratamento das células com a fração isolada induziu redução da viabilidade celular e alterações morfológicas nas duas linhagens, incluindo perda da morfologia celular típica, condensação da cromatina e diminuição da área das colônias e das células. A DE50 para células MCF-7 foi de 12,35 μg/mL e para as células MDA-MB-435 foi de 34,43 μg/mL, sendo as células MCF-7 mais sensíveis ao tratamento. A análise por Western blotting mostrou que tratamento o com a fração induziu aumento da expressão de Bax e diminuição de Bcl-2 nas células, indicando apoptose. Houve ainda aumento da expressão de caspase-9, caspase-3-ativa e caspase-8, além da diminuição da expressão da caspase-3 e pró-caspase-8. Estas proteínas estão envolvidas na via intrínseca de indução da apoptose. Foi observado também aumento de proteínas marcadoras da autofagia, LC-3 nas duas linhagens e beclin-1 nas células MDA-MB-435. Assim, os resultados do presente trabalho permitem concluir que a fração isolada do extrato de folhas de barbatimão induziu a morte por apoptose com autofagia nas células MCF-7 e MDA-MB-435. Estes resultados são importantes, pois foram demonstradas a citotoxicidade e indução de morte das células MDA-MB-435, que são ER-, além das células MCF-7 (ER+). Tendo em vista que não há tratamento curativo para tumor mamário ER-, bem como para ER+ em estágio avançado, a fração isolada parece ser candidata promissora para o desenvolvimento de fármaco para o tratamento e prevenção do câncer de mama.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Obtenção de proantocianidinas do barbatimão e avaliação da toxicidade sobre células de tumor mamário humano MDA-MB-435 e MCF-7
    (Universidade Federal de Alfenas, 2009-02-18) Santos, Lívia Mara; Gouvêa, Cibele Marli Cação Paiva; Fiorini, João Evangelista; Chavasco, Jorge Kleber
    O objetivo deste trabalho foi isolar proantocianidinas de folhas de barbatimão e avaliar a atividade citotóxica para células de tumor mamário humano, MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-). As proantocianidinas foram isoladas da fração aquosa de folhas de barbatimão, utilizando-se cromatografia em coluna de Sephadex LH-20 e metanol (10-100% ) e acetona (70%) como eluentes. A presença de proantocianidinas, nas frações obtidas, foi monitorada por cromatografia de camada delgada e esta revelou que a fração eluída com metanol 100% (usada nos experimentos) apresentou o maior teor de proantocianidinas. A despolimerização ácida permitiu quantificar as procianidinas na amostra e a análise por HPLC revelou a presença de ácido gálico, procianidina dimérica B1 e (-)-epicatequina-3-O-galato. A fração apresentou atividade antioxidante, sendo que a capacidade antioxidante total foi de 470,28 ± 14,36 mg ácido ascórbico/g de fração. A atividade seqüestrante de radicais livres DPPH 50% foi de 12 μg/mL e a atividade inibidora máxima da oxidação de proteínas foi obtida com 50 μg/mL de fração. A fração apresentou atividade citotóxica para células de tumor mamário MCF-7 e MDA-MB-435. O tratamento das células com a fração aumentou a atividade redutora de MTT, o que indica aumento da viabilidade celular. Entretanto, a análise morfológica revelou intensa vacuolização citoplasmática dependente da concentração da fração. Os vacúolos acumularam MTT, indicando tratarem-se de vacúolos autofágicos. Outras alterações morfológicas observadas com o tratamento foram a perda da morfologia celular típica, condensação da cromatina (principalmente formação de núcleo picnótico), alterações na membrana plasmática e após 48 h de tratamento houve marcante diminuição do tamanho das células. Não foi observado o padrão de DNA escada característico de apoptose nos diversos tratamentos. Os resultados parecem indicar que a fração isolada pode induzir autofagia nos dois tipos celulares estudados. A autofagia pode potencializar os efeitos antitumorais de quimioterápicos, o que pode ser útil na terapia contra o câncer e as folhas de barbatimão parecem ser uma valiosa fonte de substâncias bioativas.