Mestrado em Ciências Farmacêuticas

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Acesso aberto (Open Access)
Análise da atividade biológica de própolis de uruçu (Melipona scutellaris) do Estado da Bahia
(Universidade Federal de Alfenas, 2009-07-30) Camilo, Mariana Bastos Bernardes De Oliveira; Ikegaki, Masaharu
As abelhas sem ferrão, ou meliponíneos, são assim chamadas por apresentarem este instrumento de defesa atrofiado. Pertencem à ordem Hymenoptera, à sub-família Meliponinae e são agrupadas em três tribos distintas: Meliponini, Trigonini e Lestrimelitini. Estão distribuídas nas zonas tropical e subtropical, nas Américas do Sul e Central, Malásia, Indonésia, África e Austrália. Possuem tamanho, forma e coloração variada e um nível de organização social comparável ao das abelhas Apis mellifera. Para a construção do ninho estas abelhas utilizam cera pura, cerume (mistura de cera e própolis) ou ainda o batume (mistura de própolis e barro, conhecida como geoprópolis). As espécies brasileiras são divididas em Meliponas e Trigonas, sendo uma das representantes mais populares a Uruçu (Melipona scutellaris). O objetivo deste trabalho foi analisar a própolis de uruçu (Melipona scutellaris) proveniente do estado da Bahia quanto a suas características físicas e químicas e algumas propriedades biológicas. A própolis analisada apresentou coloração marrom escura, flexível e odor acre. O teor de fenólicos totais pelo método de Folin-Ciocalteu foi de 0,105 mg /mg de própolis em equivalentes de ácido gálico. O extrato bruto da própolis demonstrou significativa atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus nos testes de antibiograma em difusão em ágar com diâmetro de halo de 27 mm e na determinação da concentração inibitória mínima (CIM), de 3,12 a 1,56 ppm. O extrato foi fracionado, fornecendo quatro frações, numeradas em ordem decrescente de polaridade (0- mais polar e 3- menos polar). Estas frações também foram avaliadas quanto à atividade antimicrobiana e antioxidante. A fração 3 demonstrou atividade antioxidante em relação ao radical DPPH menor que a observada para o extrato, sendo de 67,36% na concentração de 90 ppm. Avaliou-se ainda a atividade citotóxica do extrato bruto sobre nove linhagens de células tumorais humanas, tendo apresentado toxicidade para todas as linhagens de maneira dose-dependente.
Acesso aberto (Open Access)
Análise da expressão gênica diferencial de aspartato proteases secretadas (SAP2 e SAP4) por Candida albicans exposta a concentrações subinibitórias de antifúngicos e contato com macrófagos
(Universidade Federal de Alfenas, 2016-02-26) Oliver, Josidel Conceição; Dias, Amanda Latercia Tranches; Silva, Eriques Gonçalves Da; Padovan, Ana Carolina Barbosa
As infecções fúngicas se tornaram um grande problema de saúde pública, especialmente em ambientes hospitalares. Candida spp. são os principais patógenos em infecções fúngicas invasivas. A produção de aspartato proteases secretadas (Sapp) por Candida spp. pode estar relacionado com o aumento do número de infecções e resistência aos medicamentos. A produção de proteases é codificada por uma família de 10 genes SAP1-10, sendo SAP2 o gene mais comumente expresso em Candida albicans. A expressão de SAP4 está associada à produção de enzimas Sap4p e formação de hifas que podem contribuir para a invasão dos tecidos hospedeiros e destruição de macrófagos em processos infecciosos. Este trabalho avaliou a expressão dos genes SAP2 e SAP4 em C. albicans ATCC 10231 cultivadas na presença ou ausência de macrófagos e expostas a concentrações subinibitórias de fluconazol e anfotericina B. Candida albicans foi cultivada em ágar Sabouraud Dextrose a 37ºC por 24 h, e posteriormente em caldo carbono levedura base enriquecido com soro-albumina bovina (YCB-BSA), e na ausência ou presença de concentrações subinibitórias de fluconazol e anfotericina B. A linhagem celular monocítica humana de origem leucemia (THP-1) foi cultivada em meio RPMI-1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino, penicilina (100 U/ml) e estreptomicina (100 μg/ml) a 37ºC, sob atmosfera de 5% de CO2 durante 10 dias. Para a indução da diferenciação das células, 106 monócitos foram cultivados em meio RPMI-1640 suplementado e forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) 100 nM durante 48 h. Foram utilizadas amostras de 5x106 C. albicans cultivadas na presença ou ausência de 106 macrófagos e expostas ou não a concentrações subinibitórias de antifúngicos. A amostras foram cultivadas em placas de cultura celular com 6 poços por 1 h a 37 °C, sob atmosfera de 5% de CO2. O RNA total foi extraído das amostras utilizando o reagente TRIzol®, após a purificação do RNA com DNase I, este foi convertido em cDNA, e, em seguida, a quantificação do gene SAP4 foi realizada por Reação em Cadeia de Polimerase quantitativa (qPCR) utilizando ACT1 como gene normalizador. Candida albicans cultivada na presença de macrófagos apresentou regulação positiva na expressão de SAP2 e SAP4 (p < 0,01), respectivamente, na ordem de 4,83 e 10,34 vezes maior se comparada com amostras da levedura cultivada sem contato com macrófagos. E ainda, a exposição de C. albicans a concentrações subinibitórias de fluconazol aumentou a expressão de SAP2 e diminuiu a expressão de SAP4, já a exposição da levedura a concentrações subinibitórias de anfotericina B diminuiu a expressão de SAP2 e SAP4. Os genes SAP2 e SAP4 são relacionados como fatores de virulência de C. albicans e sua expressão pode ser regulada pelo contato com fagócitos ou exposição a antifúngicos. Portanto, compreender a expressão desses genes na patogênese fúngica pode ajudar na pesquisa e desenvolvimento de novos medicamentos para o tratamento da candidíase, contribuindo assim para a redução da incidência de morbidade e mortalidade associada a infecções fúngicas.
Acesso aberto (Open Access)
Análise de aspartato protease (sap) como fator associado à virulência de linhagens de Candida albicans e Candida não-albicans
(Universidade Federal de Alfenas, 2013-02-15) Silva, Naiara Chaves; Dias, Amanda Latercia Tranches; Silva, Eriques Gonçalves Da; Ariosa, Marília Caixeta Franco
Candida spp. se tornaram, nas últimas décadas, importantes agentes causadores de infecções invasivas, responsáveis por altos índices de morbidade e mortalidade. Acredita-se que a aspartato protease secretada (Sap) seja um fator diretamente associado aos processos infecciosos exercendo papel determinante na patogenicidade de Candida spp. e que a exposição a concentrações subinibitórias de antifúngicos, pode aumentar a produção de Sap e selecionar isolados resistentes. Analisaram-se isolados de Candida albicans e Candida não-albicans oriundos de casos de infecção hospitalar. Avaliou-se o perfil proteico destes isolados por eletroforese SDS-PAGE. Avaliou-se, também, o perfil de sensibilidade dos isolados frente a antifúngicos de uso convencional em esquemas terapêuticos (fluconazol e anfotericina B) e a antifúngicos mais novos que ainda não fazem parte das rotinas hospitalares (voriconazol e caspofungina). Determinou-se a atividade proteolítica qualitativa e quantitativa de Sap e atividade metabólica de C. albicans e Candida não-albicans cultivados na presença e ausência de concentrações subinibitórias de fluconazol e anfotericina B. Estabeleceu-se a correlação entre os testes e por fim, avaliou-se a expressão do gene SAP2 em C. albicans ATCC 64548 e C. krusei ATCC 6258. 100% dos isolados foram sensíveis a anfotericina B, voriconazol e caspofungina e 89,9% a fluconazol. Dois isolados (7,4%) apresentaram sensibilidade dependente da dose e um (3,7%) apresentou resistência ao fluconazol. Na análise qualitativa da atividade proteolítica, 77,7% dos isolados apresentaram atividade. A maioria dos isolados de C. albicans (50%) e Candida não-albicans (32%) apresentou atividade proteolítica moderada. A adição de fluconazol ao cultivo não promoveu alterações significativas na atividade proteolítica dos isolados padrões, enquanto anfotericina B inibiu o crescimento de C. glabrata ATCC 90030 e C. krusei ATCC 6258. Na análise quantitativa, todos os isolados se apresentaram ativos, sendo que a maior atividade foi observada em Candida complexo “psilosis” 210 (100%) e a menor em C. albicans 257 (2,44%). A maioria dos isolados de C. albicans (50%) foi classificada como fracamente proteolítica, enquanto Candida não-albicans (53%) como moderadamente proteolítica. A presença de antifúngicos no cultivo alterou significativamente o percentual de degradação da maioria dos isolados. A maior diferença de percentual foi observada em C. lusitaniae 286, que na presença de ¼ da IC90 de anfotericina B aumentou 13,7x em relação à ausência do fármaco. O método quantitativo de determinação da atividade proteolítica apresentou maior sensibilidade. 63% dos isolados de C. albicans apresentaram alta atividade metabólica e 68% de Candida não-albicans, atividade moderada. A maior atividade metabólica foi observada em C. albicans 120 (61,72%) e a menor em C krusei ATCC 6258 (2,35%). A atividade metabólica da maioria dos isolados foi significativamente alterada. A maior diferença de percentual foi observada em Candida complexo “psilosis” 210, que na presença de ½ da IC50 de fluconazol apresentou redução de 8x na atividade metabólica em relação à ausência do fármaco. Houve expressão de SAP2 apenas em C. albicans ATCC 64548, que foi reduzida significativamente na presença de ¼ da IC90 de anfotericina B. A atividade de Sap pode ser considerada um fator potencial associado à virulência, uma vez que o isolado que apresentou a maior atividade apresentou sensibilidade antifúngica reduzida.
Acesso aberto (Open Access)
Análise de atividade esquistossomicida da 7-epiclusianona utilizando ferramentas bioquímicas e moleculares
(Universidade Federal de Alfenas, 2016-02-24) Silva, Matheus Siqueira; Marques, Marcos José; Gadelha, Fernanda Ramos; Castro, Lívia De Figueiredo Diniz
A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada, com alta morbidade e mortalidade, que afeta atualmente mais de 200 milhões de pessoas em todo o mundo, tendo o praziquantel (PZQ) como única opção de tratamento. Estudos descrevem várias cepas do parasito que são resistentes ao PZQ, fazendo-se necessário, estudos de novos medicamentos que possam ser utilizados no tratamento da esquistossomose. Um dos princípios do planejamento racional de fármacos consiste na escolha de alvos onde a droga produza efeito tóxico seletivo ao patógeno, e para isso é necessário definir o mecanismo de ação do fármaco proposto. A 7-epiclusianona (7-epi) é uma benzofenona que já teve atividade esquistossomicida descrita, tendo como critérios de eficácia a motilidade, danos no tegumento, acasalamento, postura de ovos, movimentação do sistema digestório e excretor. Neste sentido, o presente estudo analisou o impacto da 7-epi nos mecanismos de proteção dos vermes adultos de S. mansoni com o auxílio de ferramentas bioquímicas e biomoleculares. Uma investigação do grau de estresse oxidativo pela titulação de malondialdeído mostrou que a 7-epi na concentração de 12,5 μg/mL possui uma taxa de peroxidação lipídica no parasito reduzida quando comparada ao controle Kolliphor®, mas aumentada na concentração de 50 μg/mL (p < 0,001). De modo similar, quando se investigou a atividade no contexto ex vivo da superóxido dismutase (SOD), uma importante enzima detoxificadora do parasito, foi possível visualizar que a 7-epi interfere na sua atividade de forma significativa em relação aos controles RPMI 1640 e Kolliphor® à partir da concentração de 12,5 μg/mL (p < 0,001). Essa dosagem corresponde a 30% de inibição da atividade enzimática total em relação ao Kolliphor® e está muito próxima da dosagem de 7-epi que matou 90% dos parasitos (ED90=13,08 μg/mL) e na qual os danos no tegumento se apresentaram intensos. Complementarmente, na análise pelo docking molecular pode-se observar que a inibição da enzima não foi realizada diretamente no sítio, e que as melhores energias de interação com a 7-epi foram em uma cavidade próxima ao sítio e na junção dos monômeros. Finalmente, foram feitas análises quantitativas por qPCR do RNAm da SOD do parasito, cujos resultados não demonstraram mudança expressiva na transcrição da enzima após ação da 7-epi. Embora haja um impacto sobre a atividade da SOD do S. mansoni, este não parece ser o mecanismo principal de ação da 7-epi. Desta forma, é imprescindível a avaliação inibitória deste composto em outras enzimas do parasito, bem como a análise de outros mecanismos não enzimáticos que elucidem a ação da 7-epi em vermes adultos de S. mansoni.
Schistosomiasis is a neglected tropical disease with high morbidity and mortality, which currently affects more than 200 million people worldwide, counting only with praziquantel (PZQ) as a treatment option. Studies describe various parasite strains that are resistant to PZQ, making it necessary, studies of new drugs that can be used to treat schistosomiasis. One of the principles of drugs rational planning is to choose targets where the drug produces selective toxic effects on the pathogen, and for this is necessary to define the action mechanism of the proposed pharmaco. 7-epiclusianone (7-epi) already has schistosomicidal activity described, using as criteria of effectiveness: the motility, integument damage, mating, egg-laying and motility of the digestive and excretory system. In this direction, the present study analyzed the impact of the 7-epi against the protective mechanisms of adult worms of S. mansoni with the support of biochemical and biomolecular tools. An investigation of the degree of oxidative stress by malondialdehyde titre showed that the 7-epi at a concentration of 12,5 μg/mL has lower levels of lipid peroxidation rate comparing to the Kolliphor® control, but increased in concentration of 50 μg/ml (p <0,001). Similarly, when it investigated the activity of superoxide dismutase (SOD), an important parasite detox enzyme, in ex vivo context it was possible to see the 7-epi interfere in its activity significantly, compared to controls RPMI-1640 and Kolliphor® at a concentration of 12,5 μg /mL (p <0,001). This value corresponds to 30% of the entire enzyme activity regarding Kolliphor® and is close to the effective dose that killed 90% of the parasites (ED90=13,08 μg/mL) in which integument damages were intense. In addition, the analysis by molecular docking can observe that the inhibition of the enzyme was not performed directly on site, and that the best interaction energies with 7-epi were in a cavity near the site and in the dimer’s junction. Finally, quantitative analyzes were made by qPCR of mRNA from SOD of the parasite, that results showed no significant change in enzyme transcription after the 7-epi action. Although there is an impact on the activity of SOD of S. mansoni, this does not seem to be 7-epi main mechanism of action. Thus, it is essential the inhibitory evaluation of this compound in other parasite enzymes as well as the analysis of other non-enzymatic mechanisms that elucidate the action of 7-epi in adult worms of S. mansoni.
Acesso aberto (Open Access)
Análise de dietil tiofosfato e dietil ditiofosfato urinários empregando MISPE E Gc-Ms e estudo das correlações desses metabólitos com colinesterases sanguíneas e frequência de micronúcleos em ratos expostos a dissulfoton
(Universidade Federal de Alfenas, 2012-02-14) Santos, Mariane Gonçalves; Figueiredo, Eduardo Costa De; Borges, Keyller Bastos; Marques, Vanessa Bergamin Boralli
Um método analítico constituído por extração em fase sólida molecularmente impressa (MISPE) e cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS) foi desenvolvido para análise de metabólitos dialquil fosfatos (dietil tiosfato - DETP e dietil ditiosfato - DEDTP) em amostras de urina. Um polímero de impressão molecular (MIP) foi sintetizado utilizando-se 4-vinilpiridina como monômero funcional e etileno glicol dimetacrilato como reagente de ligação cruzada. A etapa de condicionamento foi realizada da seguinte forma: 3 mL de acetonitrila, 3 mL de tampão fosfato dibásico 0,1 mol L-1, pH 11,0 e 2 mL de água foram percolados por um cartucho de polipropileno contendo o MIP. A etapa de extração foi executada utilizando 1,0 mL de amostra de urina com pH previamente ajustado para 3,0. Finalmente, os analitos foram eluídos com 3 mL de acetonitrila e derivatizados com uma solução de 2,3,4,5,6-brometo de pentafluorobenzil a 3% em acetonitrila, a temperatura ambiente durante 1h. A amostra foi analisada por GC-MS. Curvas de calibração analítica para DETP e DEDTP foram construídas utilizando-se uma mistura de urina de diferentes indivíduos voluntários e em seis níveis de concentração. O método foi linear na faixa de 10-500 µg L-1, com r = 0,99 e limite de detecção de 3,0 µg L-1, para ambos os analitos. A precisão intra-dias e inter-dias foram avaliadas com base na porcentagem de desvio padrão relativo (%RSD) e todos os resultados foram inferiores a 15% para ambos os analitos. O método foi preciso, exato, com boa recuperação e robustez. Posteriormente o método foi utilizado para determinar as concentrações de DETP e DEDTP em amostras de urina de ratos expostos a dissulfoton. Além da concentração de dialquil fosfatos, foram determinadas a atividade de colinesterase sanguínea e a incidência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos destes mesmos animais, a fim de se estabelecer uma relação entre a dose de exposição ao dissulfon e os parâmetros avaliados. Observou-se que a atividade de colinesterase plasmática não reflete muito bem a correlação entre a dose de exposição e efeito, ao contrário da colinesterase eritrocitária. A concentração de dialquil fosfatos refletiu uma boa correlação com a dose de exposição. Através da frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos, foi possível observar que, a semelhança de outros praguicidas organofosforados (OF), o dissulfoton é capaz de causar mutagenicidade.
Acesso aberto (Open Access)
Análise de fluoxetina e norfluoxetina em plasma por microextração em fase líquida e GC-MS com derivatização no injetor
(Universidade Federal de Alfenas, 2011-12-09) Oliveira, Antônio Felipe Felicioni; Santos Neto, Álvaro José Dos; Yonamine, Maurício; Boralli, Vanessa Bergamin
A fluoxetina (FLU) é um antidepressivo amplamente prescrito para depressão e outras doenças neurológicas. Além da forma inalterada, seu metabólito, a norfluoxetina (NOR), também possui atividade farmacológica. A determinação de FLU em fluidos biológicos é necessária para fins de monitorização terapêutica (TDM), no desenvolvimento de novas formulações, bem como em análises toxicológicas e forenses. Técnicas miniaturizadas, como a microextração em fase líquida (LPME), vêm sendo utilizadas no preparo de amostras biológicas, sendo simples, sensíveis e ambientalmente adequadas. A cromatografia líquida é considerada a técnica de escolha para a análise de FLU e NOR, porque em sua forma não derivatizada esses compostos são incompatíveis com a cromatografia gasosa (GC), a qual seria de interesse por sua simplicidade e baixo custo. Este trabalho apresenta o desenvolvimento de um método para a análise de FLU e NOR em plasma por LPME-GC-MS utilizando derivatização no injetor (IPD). Após derivatizados, os fármacos se tornam adequados à análise, sendo o processo online promissor devido ao baixo consumo de agente derivatizante e não adição de etapas no preparo de amostras. Foram utilizadas fibras ocas de polipropileno (600 μm de diâmetro interno, 200 μm de espessura da parede, e 0,2 μm de tamanho dos poros) para a extração por LPME, as análises foram feitas em um GC-MS 2010 Plus Shimadzu®. Um microlitro de agente derivatizante, MBTFA (n-metil-bis trifluoroacetamida) e 2 μL de extrato foram injetados diretamente no injetor do GC. O processo de derivatização online foi otimizado quanto à vazão do gás de arraste, temperatura do injetor e da coluna, injeção sob alta pressão (HPI), e tipo de liner. O processo de extração foi avaliado quanto ao efeito de salting out, pH da fase doadora e precipitação de proteínas plasmáticas. Além desses, os parâmetros termodinâmicos (tipo de solvente, volume e concentração do tampão e diluição da amostra), e cinéticos (tempo de extração e velocidade de agitação) foram otimizados. Para a derivatização online foram otimizadas vazão de 1,7 mL/min, injetor a 300 °C e temperatura inicial da coluna de 140 °C, utilizando o modo HPI a 250 kPa e liner split. Utilizando as condições cromatográficas otimizadas e nortriptilina como padrão interno o método proposto foi: 1 mL de plasma após a precipitação de proteínas com solução de ZnSO4/NaOH, 4 mL de tampão fosfato 0,1 mol/L pH 11, fibra oca de 3,7 cm com 10 μL de éter dihexílico extraindo por 30 min a 700 rpm. O método mostrou-se linear para FLU entre 10 e 500 ng/mL (R2 = 0,9973), e para NOR entre 15 e 500 ng/mL (R2 = 0,9972). Os limites de detecção e quantificação foram de 3 e 10 ng/mL, e de 5 e 15 ng/mL para a FLU e NOR, respectivamente. A precisão e exatidão foram avaliadas para 3 concentrações dos analitos (50, 250 e 500 ng/mL). Seletividade, estabilidade de curta duração e recuperação também foram avaliadas. O método foi aplicado com sucesso na análise de plasma de 5 pacientes em tratamento com FLU. O método desenvolvido é rápido, sensível e ambientalmente adequado, reduzindo significativamente o uso de solventes tanto no preparo de amostras quanto no processo de separação. A derivatização online com MBTFA, inédita até o momento para a análise de fármacos por GC, mostrou resultados promissores podendo ser utilizada como uma alternativa a análises por HPLC.
Acesso aberto (Open Access)
Análise farmacêutica de tibolona em cápsulas magistrais por cromatografia líquida de alta eficiência
(Universidade Federal de Alfenas, 2013-02-04) Ângelo, Marilene Lopes; Araújo, Magali Benjamim De; Chorilli, Marlus; Marques, Vanessa Bergamin Boralli
A tibolona é um fármaco cuja estrutura química derivada da 19-nortestosterona e devido as suas atividades estrogênicas, androgênicas e progestogênicas é utilizada para tratamento de sintomas da menopausa relacionados a deficiência estrogência em mulheres pós-menopausadas e também com indicação na prevenção da osteoporose. Não há monografia oficial para quantificação de tibolona na forma farmacêutica cápsulas nem teste de dissolução. Sendo assim, o objetivo desse estudo foi desenvolver, validar e aplicar um método rápido, seletivo, preciso e indicador de estabilidade por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a determinação de tibolona em cápsulas e um teste de dissolução para quantificação in vitro de sua liberação no meio de dissolução. O método indicador de estabilidade foi desenvolvido baseado no ensaio de degradação forçada, submetendo o fármaco a degradação ácida, alcalina, neutra, oxidativa, térmica e luz UV. A separação foi realizada em uma coluna de fase reversa C18 (250 mm x 4,0 mm; 5 µm), com acetonitrila:água (60:40) como fase móvel, vazão de 1 mL/min e detecção UV em 205 nm. O método foi validado e todos os parâmetros ficaram dentro dos limites aceitáveis, segundo o ICH e ANVISA. O método proposto foi aplicado e apresentou resultados satisfatórios na análise quantitativa de tibolona em cápsulas. Também foi desenvolvido um método de dissolução para cápsulas de tibolona, onde o melhor perfil de dissolução obtido, foi alcançado com 0,5% de lauril sulfato de sódio (LSS) em água como meio de dissolução, aparato pá a 100 rpm e tempo de coleta de 45 minutos, na qual a percentagem de tibolona liberada foi maior 80% (Q = 75). A quantificação foi realizada por CLAE a 205 nm. Todos os parâmetros de validação foram considerados satisfatórios. Portanto, os métodos desenvolvidos são adequados para análise de controle de qualidade, estudos de estabilidade, ensaios de dissolução e perfil de dissolução de cápsulas contendo este fármaco.
Acesso aberto (Open Access)
Aplicação das técnicas QuEChERS e MISPE para a determinação cromatográfica de resíduos de organofosforados em morango
(Universidade Federal de Alfenas, 2012-02-16) Baldim, Isabela Mendes; Sakakibara, Isarita Martins; Nascimento, Elizabeth De Souza; Azevedo, Luciana
Os praguicidas, especialmente os organofosforados, têm uma grande importância no combate e na prevenção de pragas, alcançando, desse modo, um grande benefício para a produção e a garantia de alimento suficiente para a população. No entanto esse benefício pode ser revertido em prejuízo para a integridade humana e ambiental, devido à permanência de seus resíduos. Assim, a determinação de resíduos de praguicidas desempenha um papel importante para a estimativa da exposição a esses compostos, permitindo avaliar a conformidade da produção com as Boas Práticas Agrícolas, possibilitando decisões regulatórias comerciais visando garantir a segurança alimentar. Face ao exposto, o objetivo geral deste trabalho foi avaliar o desempenho de duas técnicas de preparo de amostra de morango: extração em fase sólida molecularmente impressa (MISPE) e extração em fase sólida dispersiva (QuEChERS), visando o isolamento e a concentração de resíduos dos organofosforados diazinon, dissulfotom, paration, clorpirifós e malation para análise por cromatografia gasosa com detector fotométrico de chama (CG-DFC). Foi empregada uma coluna megabore ZB-35 Phenomenex® (35% fenil 65% dimetil siloxano, 30 m x 0,53 mm; 0,5 μm), hidrogênio como gás de arraste na vazão de 8,0 mL min-1. Pirimifós foi usado como padrão interno (0,25 μg g−1). O método apresentou seletividade, bem como linearidade na faixa de 0,10 a 1,00 μg g−1 (para diazinon, dissulfotom, paration e clorpirifós) e 0,10 a 2,00 μg g−1 (para malation). A precisão intra e inter-ensaio apresentou desvio padrão relativo entre 1,55 a 11,75% (QuEChERS) e entre 1,15 a 14,10% (MISPE) para os níveis baixo, médio e alto, do intervalo linear. A eficiência de extração para as técnicas QuEChERS e MISPE foi de 81,64 a 100,00% e 65,25 a 87,70%, respectivamente. A detectabilidade, em ambos os métodos, foi satisfatória, uma vez que atendeu ao Limite Máximo de Resíduo (LMR) estabelecido para os analitos. Os métodos apresentaram robustez, de acordo com o teste de Youden. A técnica MISPE demonstrou ser de baixo custo e simples execução além de ser bastante resistente, visto que o sorvente sintetizado suporta condições extremas de pH e temperatura e, em apenas um cartucho puderam ser feitas de 50 a 80 extrações, revelando grande potencial na análise de alimentos. A técnica QuEChERS é simples e rápida, em comparação à MISPE, especialmente em relação à etapa de clean up que não utiliza cartuchos ou sistemas de vácuo, o que possibilita que todas as análises sejam feitas em uma só corrida analítica. Os resultados obtidos sugerem que os métodos são úteis para o monitoramento de resíduos de organofosforados em amostras de morango, uma vez que atendem a todos os requisitos para a avaliação de resíduos em alimentos, visando à segurança do consumidor.
Acesso aberto (Open Access)
Aplicação de bioindicadores e avaliação clínica em trabalhadores rurais expostos aos praguicidas organofosforados visando subsidiar a implantação de uma rede de atenção primária à saúde
(Universidade Federal de Alfenas, 2016-11-24) Silvério, Alessandra Cristina Pupin; Sakakibara, Isarita Martins; Antunes, Lusânia Maria Greggi; Silva, Jandira Maciel Da; Terra, Fábio De Souza; Azevedo, Luciana
O uso de praguicidas cresceu no Brasil nos últimos anos e, consequentemente, cresceram também os quadros de intoxicação provenientes da exposição à essas substâncias, principalmente em trabalhadores rurais. A classe dos praguicidas organofosforados (OF) é uma das mais utilizadas, todavia sua toxicidade também é elevada colocando, consequentemente, essa população em risco. Em vista disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar a exposição de trabalhadores rurais aos praguicidas OF por meio da determinação de bioindicadores associados à avaliação clínica, visando dar subsídios ao poder público para a implantação de uma rede de atenção primária à saúde. O estudo foi transversal, de base populacional e natureza avaliativa e aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade José do Rosário Vellano (UNIFENAS) e da Universidade Federal de Alfenas (UNIFAL-MG), pareceres nº 149718 e 415856, respectivamente) com uma amostragem total de 1027 trabalhadores rurais da Regional de Saúde de Alfenas, MG, considerando-se variáveis epidemiológicas, clínicas e riscos ocupacionais. Foram aplicados dois questionários estruturados, um para levantamento de dados epidemiológicos e clínicos dos trabalhadores rurais e o Instrumento de Avaliação da Atenção Primária (PCATool), além da determinação das colinesterases plasmática, eritrocitária e total, bem como as provas de função hepática e renal. Posteriormente, dessa população, selecionou-se dois grupos expostos ocupacionalmente à mistura complexa de praguicidas, contendo OF, (n = 94) e expostos ocupacionalmente à mistura complexa de praguicidas, sem OF, (n = 94), para a aplicação dos bioindicadores dialquilfosfatos urinários, testes de genotoxicidade (ensaios do citoma e do cometa) e análise polimórfica da CYP2C9, comparando esses resultados com aqueles obtidos em um grupo de indivíduos não expostos ocupacionalmente aos praguicidas, habitantes de zona urbana (n = 50). A partir das respostas observadas no PCATool (n = 1027), pode ser verificado que a despeito de uma alta cobertura, o risco ocupacional e suas consequências não têm sido detectados, pelos serviços de saúde da família, que se apresentam como não orientados à atenção primária. Quando comparado aos demais grupos de estudo, os resultados obtidos, a partir do levantamento de dados clínicos, mostraram alterações significativas no sistema nervoso central, sistema respiratório e auditivo nos trabalhadores expostos à mistura contendo OF. No tocante à determinação dos bioindicadores propostos, no grupo exposto ocupacionalmente à mistura contendo OF, a atividade da colinesterase plasmática, eritrocitária e total, encontrou-se diminuída em 63,8%, 12,8% e 14,8%, respectivamente, detecção de dialquilfosfatos na urina de 92,6% dos voluntários desse grupo e mudança significativa em todos os parâmetros de ensaio do citoma, quando comparado com o grupo não exposto ocupacionalmente aos praguicidas. O ensaio do cometa mostrou danos ao DNA por meio da diferença significativa entre os grupos expostos e o grupo não exposto ocupacionalmente, por meio da análise do Tail moment. A análise polimórfica de CYP2C9 mostrou maior frequência dos alelos *1/*2 e *1/*3, nos grupos expostos aos praguicidas em relação ao grupo não exposto ocupacionalmente, todavia, não foram observadas relações significativas entre essa e a atividade das colinesterases, a concentração de dialquilfosfatos na urina e os testes de genotoxicidade. Os resultados obtidos nesse pioneiro estudo, com uma população rural brasileira, sugerem que esses trabalhadores estão expostos aos praguicidas de forma arriscada, fato este que associado ao baixo grau de escolaridade e à precariedade de ações programáticas, aumenta a probabilidade de aparecimento de quadros de intoxicação, demonstrando assim a importância do treinamento das equipes de saúde para a promoção, a prevenção e o tratamento dessa população. O emprego de bioindicadores de dose interna, de efeito, de genotoxicidade e de suscetibilidade, em combinação, como utilizado no presente trabalho, é primordial para a avaliação da população rural, diminuindo a probabilidade do aparecimento de doenças advindas da exposição ocupacional aos praguicidas.
Acesso aberto (Open Access)
Aprimoramento de quimioteca de substâncias bioativas candidatas a fármacos por meio do uso de estratégias de prospecção tecnológica
(Universidade Federal de Alfenas, 2019-02-27) Pereira, André Victor; Veloso, Márcia Paranho; Oliveira, Denilson Ferreira; Franco, Lucas Lopardi
Uma quimioteca pode ser definida como uma coleção de substâncias que foram bioensaiadas in vitro e que estão dispostas em uma base de dados, e organizadas de acordo com vários parâmetros, como, por exemplo, suas propriedades estruturais ou físico-químicas específicas. O Laboratório de Avaliação e Síntese de Substâncias Bioativas – LASSBio® possui uma quimioteca de substâncias bioativas, candidatas a fármacos, públicas e sigilosas, de interesse acadêmico e empresarial. Tal quimioteca foi objeto de estudo desta dissertação de mestrado acadêmico que visa aprimorar esta coleção de substâncias, utilizando as estratégias da Prospecção Tecnológica, como a busca de anterioridades e a mineração de dados, visando a confirmação de ineditibilidade, principalmente das substâncias sigilosas e de algo valor agregado para o setor industrial e a otimização desta coleção, por meio da síntese química e avaliação farmacológica de uma série de derivados inéditos, resultantes deste processo de prospecção. Os estudos de Prospecção Tecnológica das 117 substâncias sigilosas da Quimioteca do LASSBio foram realizados, utilizando bases de patentes (USPTO, ESPACENET, WIPO, INPI, SIPO, KIPO, DERWENT, dentre outras) e banco de dados de estruturas químicas (SCIFINDER) que também foram utilizadas nesta parte do projeto de modo assegurar a total ineditibilidade das substâncias sigilosas, por meio do uso da estratégia de mineração de dados e para verificar o perfil de atividade inventiva de cada uma. A partir dos resultados dos estudos de Prospecção Tecnológica foi selecionada uma série de análogos que apresentou uma promissora modificação estrutural. O planejamento da nova série de derivados dos compostos baseado nas séries LASSBio 1783 à 1790 e LASSBio 1984 à 1988 (que apresentaram menores perfis de similaridades nos estudos de Prospecção Tecnológica) foi realizado utilizando as estratégias da Química Farmacêutica Medicinal, visando uma rota de acesso sintético relativamente simples, de poucas etapas e que possa produzir os compostos finais em bons rendimentos totais. A rota sintética desenvolvida para obtenção dos análogos, consistiu na síntese de intermediários hidrazídicos (intermediário-chave) para a obtenção de N-acil-hidrazonas a partir do ácido quínico, na qual foram sintetizados quatro novos compostos, caracterizados por meio de técnicas analíticas (infra-vermelho, RMN de 1H e 13C, ponto de fusão) e após a certificação do grau de pureza por HPLC foram cadastrados e depositados na quimioteca do LASSBio.
Acesso aberto (Open Access)
Associação entre degeneração neuronal e doses suprafisiológicas de dois tipos de esteroides anabolizantes em encéfalos de ratos
(Universidade Federal de Alfenas, 2022-07-15) Corsini, Wagner; Rodrigues, Maria Rita; Figueiredo, Sônia Aparecida; Paula, Fernanda Borges De Araújo
O uso abusivo de esteroides anabolizantes obteve um exponencial crescente desde sua origem, tornando-se um assunto importante de ser questionado e avaliado, sendo necessário educar a população em geral, principalmente, o público do sexo masculino e de meia idade, considerado o público alvo. Os efeitos e consequências desencadeadas pelos esteroides anabolizantes no organismo acontecem de diversas maneiras, podendo afetar vários órgãos e tecidos. De acordo com a literatura científica, seus danos estão relacionados com o sistema reprodutor masculino, como: atrofia testicular e problemas hormonais. Além disso, podem causar efeitos cardiovasculares (fator potencial de morte súbita no indivíduo), hepáticos, renais, no sistema hematopoiético, no perfil lipídico sanguíneo e, principalmente, no sistema nervoso central, causando agressividade, irritabilidade, depressão, além de afetar o domínio cognitivo, como: aprendizado, memória, atenção e a capacidade de reconhecer informações. As amostras deste experimento fazem parte do acervo de amostras histológicas do Departamento de Anatomia da Unifal-MG, uma vez que, foram coletadas de um experimento de doutorado do Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Neste experimento, foram utilizadas 70 amostras de encéfalos de ratos machos Wistar, com idade de 60 dias. Os animais foram expostos a dois esteroides anabolizantes distintos, o Cipionato de Testosterona (DP) e o Decanoato de Nandrolona (DC), considerados os anabolizantes mais conhecidos entre os usuários e também no Brasil. Para o estudo, os animais foram divididos em dois tratamentos: DP e DC, divididos em sedentários e exercício físico, subdivididos em três outros grupos, que foram separados em doses: 5mg/kg, 10mg/kg e 15mg/kg, cada grupo constavam 5 animais, assim formando 12 grupos, além disso, foram formados dois grupos controles (5 animais cada), um para grupo sedentário (CS) e outro para o exercício físico (CE), totalizando em 14 grupos. Os encéfalos seguiram todos os procedimentos histológicos, para posterior análise. Por conseguinte, foram realizadas as estimativas de corpos de neurônios no locus ceruleus e hipotálamo, incluindo a realização das técnicas de Ensaio de Tunel e coloração de Von Kossa. Também foram realizadas as mensurações de áreas corticais: retrosplenial, motora e somatossensorial. No locus ceruleus e no hipotálamo, foi possível observar significativa redução de neurônios nos grupos sedentários e exercitados, tratados com ambos anabolizantes, também sendo possível observar esta redução quando comparados o grupo controle sedentário com os grupos exercitados e tratados com anabolizantes. As áreas corticais: motora e somatossensorial, apresentaram significativas reduções em suas mensurações, nos grupos sedentários. Portanto, os resultados obtidos apontam que ambos os esteroides anabolizantes podem causar efeitos degenerativos no locus ceruleus e no hipotálamo. De acordo com a técnica de Von Kossa, sugere-se que a provável causa da morte neuronal é a necrose, ocasionada por desequilíbrio do cálcio intracelular, também sendo possível concluir que o uso crônico de esteroides anabolizantes, podem causar redução no córtex motor e somatossensorial em animais não exercitados.
Acesso aberto (Open Access)
Atividade antioxidante das benzofenonas e extrato hexânico do pericarpo dos frutos de Rheedia brasiliensis
(Universidade Federal de Alfenas, 2008-05-30) Derogis, Priscilla Bento Matos Cruz; Santos, Marcelo Henrique Dos; Colepicolo Neto, Pio; Viegas Junior, Cláudio
Plantas medicinais são utilizadas no tratamento e na cura de enfermidades desde a antiguidade. Pela sua riqueza química e farmacológica, têm sido alvo de crescentes estudos no intuito de comprovar atividades atribuídas pela crença popular ou mesmo obter novos compostos ativos. A família Clusiaceae compreende quarenta e nove gêneros de ampla distribuição. Entre eles está o gênero Rheedia, também conhecido como Garcinia, que é rico em uma considerável diversidade de compostos, tais como benzofenonas polipreniladas, flavonóides, proantocianinas e xantonas. A partir do extrato hexânico do pericarpo de Rheedia brasiliensis foi possível o isolamento de 3 benzofenonas, garciniafenona, guttiferona-A e 7- epi-clusianona. Tais compostos foram então avaliados in vitro e in vivo quanto a atividade antioxidante, utilizando diferentes técnicas. A determinação da atividade antioxidante dos compostos justifica-se pela comprovada relação entre os EROs/ERNs em várias doenças, incluindo câncer, arteriosclerose, artrite reumatóide, doenças inflamatórias. In vitro, foram avaliadas a atividade sequestrante de radicais DPPH, o poder redutor, a atividade quelante de íons ferro e in vivo a lipoperoxidação através da medida espectrofotométrica de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico. In vitro, a guttiferona foi o composto mais ativo, seguida da 7-epi-clusianona e por fim a garciniafenona, demonstrando que o grupo catecol é importante para a atividade antioxidante. Além disso, a atividade do extrato apresentou uma correlação positiva com a da 7-epi-clusianona, o que era esperado por ser o seu principal componente. Já no teste in vivo, os diferentes compostos, inclusive o extrato, em duas ou mais concentrações foram efetivos demonstrando inclusive um efeito hepatoprotetor comprovado pela diminuição da peroxidação lipídica e dos níveis das transaminases.
Acesso aberto (Open Access)
Atividade biológica do extrato da fermentação do fungo endófito de café Alternaria alternata
(Universidade Federal de Alfenas, 2009-07-21) Fernandes, Maurette Dos Reis Vieira; Ikegaki, Masaharu; Dias, Amanda Latercia Tranchers; Pfenning, Ludwig Heinrich
A busca de novos princípios ativos de microrganismos é uma das áreas em que mais se investe nos países desenvolvidos. Entre estes microrganismos, os fungos têm grande destaque por sua produção de diversos metabólitos de interesse farmacológico. Endófitos são todos os microrganismos, cultiváveis ou não, que habitam o interior dos tecidos vegetais, sem causar danos ao hospedeiro e sem desenvolver estruturas externas, excluindo, dessa forma, bactérias noduladoras e micorrizas. Considerando a importância da cultura do café no estado de Minas Gerais, pesquisas com fungos endófitos de café, permitem a ampliação do conhecimento da diversidade desses fungos. Neste estudo, um total de 22 fungos endófitos isolados de café (Coffea arabica L.) foi cultivado in vitro. O screening foi conduzido usando o método de difusão em agar contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e leveduras. O isolado mais efetivo contra todos os microrganismos testados foi a linhagem Alternaria alternata e posteriormente, seu extrato bruto foi analisado. A concentração de fenólicos totais do extrato bruto do endófito foi de 3,44 μgEAG/mg de extrato. Para os testes de atividade antimicrobiana, a concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida e fungicida mínima (CBFM) conta Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Candida albicans foram determinadas. Os valores de CIM variaram entre 50-100 μg/mL para S. aureus e 400-800 μg/mL para E. coli. O extrato não apresentou atividade nas concentrações testadas para C. albicans. Além destes testes, foi avaliada a atividade antioxidante pela capacidade sequestrante de radicais DPPH e pela oxidação do sistema β-caroteno/ácido linoleico, as quais não apresentaram resultados significativos. A atividade antitumoral foi avaliada pelo teste do MTT. À diluição de 400 μg/mL, o extrato apresentou atividade de aproximadamente 50% sobre células HeLa in vitro. Esses resultados demonstram que fungos endófitos podem ser uma promissora fonte de compostos antimicrobianos necessitando de estudos posteriores.
The search for new active components of microorganisms is one of the areas of greatest investment in developed countries. Among these microorganisms, fungi are distinguished by their ability to produce diverse metabolites for pharmacological purposes. Endophytes are all microorganisms, cultivated or not, that live inside plant tissue, without causing harm to the host and without developing external structures, excluding nodule bacteria and mycorrhiza. Considering the importance of coffee production in the state of Minas Gerais, studies of endophytic fungi in coffee allow for greater understanding of the diversity of these fungi. In this study, a total of 22 endophytic fungi isolated from coffee (Coffea arabica L.) were cultivated in vitro. The screening was conducted using the agar diffusion method against Gram-positive and Gram-negative bacteria and yeast. The most effective isolated fungus among all of the tested microorganisms was the lineage Alternaria alternata, and subsequently, its extract was assayed. The total phenolic content was 3.44 μgGAE/mg of the crude extract. For the antimicrobial activity assays, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal and fungicidal concentration (MBFC) against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans were determined. The ranges of MIC values were 50-100 μg/mL for S. aureus and 800-1000 μg/mL for E. coli. The crude extract did not show activity in the tested concentrations for C. albicans. Through these tests, the antioxidant activity of the fungus was assayed through its ability to scavenge DPPH radicals and through β-carotene/linoleic acid system oxidation, both of which were not significant. Antitumour activity was studied by the MTT assay. At a dilution of 400 μg/mL, the extract displayed a cytotoxic activity of approximately 50% towards HeLa cells in vitro. These results indicate that endophytic fungi could be a promising source of antimicrobial compounds and are worthy of further study.
Acesso aberto (Open Access)
Atividade leishmanicida de constituintes químicos dos frutos de Garcinia brasiliensis
(Universidade Federal de Alfenas, 2009-02-02) Pereira, Ivan De Oliveira; Santos, Marcelo Henrique Dos; Silva, Geraldo Alves Da; Alburquerque, Sérgio De
As plantas são utilizadas no tratamento e na cura de enfermidades desde a antiguidade, quando o homem começou a usar a natureza em seu favor. Estas plantas, pela sua riqueza química e farmacológica, têm sido estudadas no intuito de comprovar atividades atribuídas pela crença popular ou mesmo obter novos compostos ativos. Neste contexto, a família Clusiaceae que compreende quarenta e nove gêneros de plantas de ampla distribuição tem sido investigada. Entre eles está o gênero Garcinia, também conhecido como Rheedia, que é rico em uma considerável diversidade de compostos, tais como benzofenonas polipreniladas e flavonóides. Neste trabalho foram obtidos os extratos hexânico, acetato-etílico e etanólico do pericarpo dos frutos de Garcinia brasiliensis. Após avaliação da atividade leishmanicida in vitro, o extrato hexânico se mostrou o mais ativo. Desta forma, foi fracionado e dele obteve-se três benzofenonas, 7-epi-clusianona, garciniafenona e guttiferona-a, que foram avaliadas quanto as suas atividades leishmanicida e toxicidade. No intuito de determinar um possível mecanismo de ação, os extratos foram avaliados quanto a sua capacidade de inibir proteases isoladas de amastigotas, sendo o extrato acetato etílico o que apresentou melhor resultado. Assim, este foi fracionado e dele se obteve o biflavonóide fukugetina, que também foi avaliado quanto à capacidade de inibir proteases, apresentando resultados muito satisfatórios. Todavia, quando o extrato acetato etílico e a fukugetina foram avaliados quanto à atividade leishmanicida in vitro não foi observado o mesmo efeito. Com estes resultados podemos observar que a polaridade dos extratos e das moléculas testados neste estudo pode ser um fator imprescindível na atividade leishmanicida, possivelmente por dificultar o transporte destas substâncias através de membrana plasmática.
The plants have been used in the treatment and cure of illnesses since the antique. When the men started to use the nature in your service. These plants, due to their chemical and pharmaceutical characteristics, have been studied in order to prove their theoretical medicinal capabilities or to obtain new active components. In this context, the Clusiaceae family is made up of forty nine species that are widely distributed, have been studied. Among these species is the genus Rheedia, also known as Garcinia, which is rich in a wide range of components, such as polyprenylated benzophenones and flavonoids. In this work were obtained the hexanic, ethyl-acetate and ethanolic extracts from pericarp of fruits from Garcinia brasiliensis. After the evaluation of leishmanicidal activity in vitro, the hexanic extract shown the more active, thus, this was fractioned yielding three benzophenones - 7-epi-clusianone, garciniaphenone and guttiferone-a – that were evaluated how their leishmanicidal and toxicity activities. With the intention of to determine a possible mechanism of action, these components were then evaluated of their capacity of to inhibit proteases isolated from amastigote forms of Leishmania, have been the ethyl-acetate extract the more effective. Thus this was fractioned yielding the biflavonoid fukugetin, witch also was evaluated in relation your proteases inhibition capacity, showing results very satisfactory. However, when the ethyl-acetate extract and the fukugetin were evaluated in relation the leishmanicidal activity in vitro, not was find the same effect. With these results, we might realize that the hydrophilic of extracts and molecules evaluated in this study can be an essential factor in the leishmanicidal activity, possible by to make transport difficult of this compounds across the plasmatic membrane.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação da atividade antimicrobiana de extrato do fruto, folha e casca de caule do Zizyphus joazeiro Mart
(Universidade Federal de Alfenas, 2010-02-23) Melo, Maria Do Socorro Fernandes; Chavasco, Jorge Kleber; Paula, Claudete Rodrigues; Dias, Amanda Latércia Tranches
O estudo de plantas medicinais possibilita a descoberta de novos compostos bioativos. O aparecimento de microrganismos resistentes aos antibióticos reforça essa pesquisa. Dentre os microrganismos resistentes o Mycobacterium tuberculosis apresenta mutação contínua mudando seu perfil de sensibilidade, acarretando insucesso no tratamento. A busca de propriedades antimicrobianas de extratos de plantas e seus constituintes têm sido incentivada e intensificada. Sendo assim, entre inúmeras espécies vegetais a serem investigadas, destaca-se a Zizyphus joazeiro Mart., pertencente à família Rhamnaceae, que apresenta em sua composição química uma grande diversidade de metabólitos secundários bioativos, destacando-se triterpenóides e alcalóides de grande interesse medicinal. Sua característica principal é que esta árvore resiste muito bem às secas do sertão nordestino, tornando-se dessa forma muito útil tanto para os homens, fornecendo sombra e frutos, como para animais que comem suas folhas mucilaginosas. O objetivo do trabalho, foi avaliar a atividade antimicrobiana, in vitro de extratos de folhas, frutos e casca do caule de Zizyphus joazeiro Mart. contra leveduras e bactérias Gram positivas, Gram negativas e M. bovis. utilizando a técnica de difusão em agar.Todos os extratos brutos apresentaram atividade antimicrobiana. Dos microrganismos utilizados somente Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus e Candida albicans mostraram-se sensíveis. Nenhum dos extratos testados apresentou atividade contra Mycobacterium bovis
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação da atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas encontradas no cerrados do sul de minas gerais
(Universidade Federal de Alfenas, 2013-02-15) Chavasco, Juliana Moscardini; Dias, Amanda Latercia Tranches; Avelino, Cassia Carneiro; Silva, Eriques Gonçalves Da
O uso indiscriminado de antimicrobianos pode estar associado ao fenômeno da resistência microbiana, levando ao insucesso no tratamento das infecções e impulsionando a busca por novas alternativas terapêuticas, dentre elas, os bioativos obtidos a partir de fontes vegetais. Foi avaliada a atividade antimicrobiana de extratos hidroetanólicos de plantas sobre bactérias Gram positiva, Gram negativa, leveduras, Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis pela técnica de difusão em agar e microdiluição em caldo. Dentre os extratos avaliados pelo método de difusão em agar, o extrato de Bidens pilosa folha apresentou a mais expressiva média de halos de inibição de crescimento frente aos microrganismos utilizados, seguido por Bidens pilosa flor, E. pyriformis folha, M. cauliflora folha e E. pyriformis semente que apresentaram estatisticamente a mesma média de formação de halos inibitórios sobre bactérias Gram positivas, Gram negativas e leveduras. Os extratos de Heliconia rostrata não apresentaram atividade. Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis mostraram-se resistentes a todos os extratos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). As bactérias Gram negativas E. coli, E. cloacae, S. marcescens e P. aeruginosa também apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade frente aos extratos (p>0.05). O perfil de senbilidade dos fungos C. albicans e S. cerevisiae foram comparáveis entre si e entre as bactérias Gram positivas B. subtilis, E. faecalis e Gram negativa S. typhimurium (p>0.05). Os extratos que apresentaram ação inibitória através do ensaio de microdiluição em caldo foram os mesmos extratos ativos no teste de difusão em agar. A avaliação da citotoxicidade foi realizada sobre células C6-36 de larvas de mosquito Aedes albopictus. Os extratos de caule e flor de Heliconia rostrata, folha e caule de Plinia cauliflora, semente de Anonna crassiflora e caule, flor e raiz de Bidens pilosa não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os maiores índices de seletividade foram apresentados pelos extratos de A. crassiflora caule e B. pilosa flor para S. aureus, apresentando potencial para estudos como futuros candidatos a fármacos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). Dos microrganismos que apresentaram alguma sensibilidade a qualquer um dos extratos, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. cloacae e E. coli foram estatisticamente, igualmente os menos sensíveis. Apenas os extratos de B. pilosa folha apresentou igualdade, estatisticamente significativa, da média de efetividade inibitória quando comparado ao controle positivo, a clorexidina
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação da atividade Leishmanicida de compostos organopaladados com ligantes nitrogenados e substituintes haletos e pseudohaletos
(Universidade Federal de Alfenas, 2010-02-09) Franco, Lilian Pereira; Marques, Marcos José; Silva, Roberto Santana Da; Torres, Cláudia
Leishmaniose é uma doença causada por um protozoário do gênero Leishmania. É considerada uma doença negligenciada, com altos índices em países em desenvolvimento. As opções de quimioterapia são limitadas e entre elas os problemas mais comuns são: a longa duração do tratamento, o alto custo, a resistência do parasito, a eficácia variável entre cepas ou espécies, os vários efeitos colaterais da droga e toxicidade. A necessidade de novos agentes terapêuticos seguros, efetivos e menos tóxicos é urgente. A co-infecção HIV/Leishmania tem aumentado ao redor do mundo, mudando a distribuição geográfica e a incidência da doença. O estudo da atividade de metais de transição tem sido realizado desde a descoberta da atividade antitumoral da platina (Pt) em 1965. Os complexos de paládio (II) têm se destacado especialmente por suas atividades biológicas variadas como antitumoral, atividade antiprotozoária, ação anti-inflamatória e atividade leishmanicida, além de apresentar menor toxicidade que a Pt. Devido à necessidade de novos agentes terapêuticos, doze novos complexos de paládio(II), obtidos a partir de dois ligantes iminicos, foram sintetizados e caracterizados por análise elementar, infravermelho (IR) e espectroscopia 1H RMN. A avaliação in vitro dos ligantes e complexos foi realizada sobre formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e sua citotoxicidade determinada em macrófagos murinos, através do teste MTT. A maioria dos complexos exibiram uma atividade leishmanicida que variou de 5,72-53,01 mg /mL para o IC50. A atividade dos ligantes foi melhorada após a coordenação com o paládio e a substituição por alguns radicais aumentaram ainda mais a atividade leishmanicida. Os compostos mais ativos foram o complexo de cloreto (serie A) e os complexos de tiocianato (serie A e B). Os resultados observados indicaram que os novos compostos além de apresentarem uma potencial atividade leishmanicida possuem menor citotoxicidade e maior índice de seletividade que a Pentamidina, droga de referência. Portanto, esses novos compostos são promissores agentes no tratamento contra a leishmaniose porém novas avaliações devem ser realizadas para determinação da toxicidade in vivo e mecanismo de ação.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação da produção de melanina em Cryptococcus neoformans sob diferentes condições de cultivo e por meio da eletroforese não-desnaturante: influência in vitro na atividade de antifúngicos
(Universidade Federal de Alfenas, 2008-08-27) Pereira, Cristiane Bigatti; Siqueira, Antonio Martins De; Silva, Eriques Gonçalves Da; Chavasco, Jorge Kleber
A criptococose é infecção fúngica oportunista causada pelo Cryptococcus neoformans com alta incidência em indivíduos imunodebilitados, principalmente entre pacientes com Aids, sendo o número de casos registrados da doença no Brasil, 474.279, de 1980 a junho de 2007. Para melhor compreensão do agente etiológico, da criptococose e dos fatores associados à virulência são necessários estudos adicionais sobre a patogênese deste microrganismo. Dentre os fatores relacionados à virulência, a melanina é um dos principais e sua síntese ocorre por ação da lacase. Assim sendo, foram realizados estudos para avaliar a produção do pigmento entre amostras clínicas e ambientais de C. neoformans sob diferentes condições de pH (5, 6 e 7) e temperatura (25 °C, 30 °C e 35°C). A relação do pigmento com o perfil de sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e anfotericina B também foi avaliada. Os resultados mostraram que não houve comportamento uniforme de melanização entre as amostras. As maiores alterações de pigmentação e crescimento das leveduras foram observadas nos meios de cultura com pH 7 incubados a 35 °C. A técnica de eletroforese em gel PAGE nãodesnaturante mostrou-se uma ferramenta útil na análise da lacase produzida pelas amostras de C. neoformans com posterior quantificação de melanina por densitometria das bandas após reação com o substrato L-dopa. As amostras ambientais apresentaram os maiores valores de intensidade de melanina e ampla faixa de variação. Mais da metade das amostras clínicas (56,2 %) apresentaram as menores intensidades de melanina. A amostra clínica ICB 88 revelou duas bandas de melanina no gel indicando a presença de duas isoformas da lacase. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e anfotericina B, através das metodologias de difusão em agar por disco e fita (E-test®), mostraram que a leitura após 72 h de incubação pode levar a erro na classificação quanto ao perfil de sensibilidade, tanto nos testes com ou sem adição de melanina. Adição de melanina pareceu não interferir nos resultados frente ao fluconazol nas metodologias de difusão em agar a partir de disco e fita (E-test®). Para anfotericina B houve aumento de CIMs para 90,9 % das amostras, sendo 45,4 % superior a 2 diluições com adição de melanina nos testes de sensibilidade na metodologia de difusão em agar a partir de fita (E-test®).
Cryptococcosis is an opportunistic fungal infection caused by Cryptococcus neoformans that has presented increased incidence with the great number of immunocompromised patients, mainly AIDS ones, being 474.273, the number of cases registered in Brazil since 1980 to june 2007. Additional studies about microorganism’s pathogenesis is necessary for better comprehension about the aethyological agent, criptococosis and associated factors to virulence. Among virulence’s factors, melanin is one of the mainly and its synthesis occurs by laccases action. So, some studies were performed to evaluate the melanin pigment’s production between clinical and environmental strains of C. neoformans under different conditions of pH (5, 6 and 7) and temperatures (25 °C, 30 °C and 35 °C). The pigment and susceptibility to fluconazole and amphotericin B relation’s was also evaluated. The results showed that there wasn’t comparable behaviour of melanization among the strains. The higher alterations on yeast’s pigmentation and growth were noted under pH 7 and at 35 °C. The electrophoresis technique on non-denaturant PAGE gel showed to be an useful tool to the analysis of laccase produced by C. neoformans strains and posterior quantification of melanin by spot’s densitometry after reaction with L-dopa substrate. The environmental strains showed the higher values of melanin intensities and large variation range. Over than a half of clinical strains (56.2 %) showed the lower melanin’s intensities. The clinical strain, ICB 88 revealed two melanin spots on gel indicating the presence of two laccase isoforms. The susceptibility antifungal tests with fluconazole and amphotericin B through disk diffusion and E-test® methods showed that reading after 72 hours can induce to mistakes on the susceptibility profile of strains, either in presence or absence of melanin. Addition of melanin on medium surface appears not change the results of susceptibility to fluconazole in disk diffusion and E-test®, but to amphotericin B was observed increase of MICs to 90.9 % of strains, been 45.4 % upper to 2 dilutions after addition of melanin in Etest ® methodology.
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação de procedimentos para contagem de Saccharomyces cerevisiae em sistemas de análise por injeção em fluxo (FIA)
(Universidade Federal de Alfenas, 2008-08-04) Pessôa, Gustavo De Souza; Luccas, Pedro Orival; Pereira Filho, Edenir Rodrigues; Silva, Paulo Márcio Faria E
A contagem celular é uma técnica empregada para se monitorar a reprodução de células em meios de cultivo de interesse em ensaios biológicos. Um sistema de análise por injeção em fluxo foi desenvolvido para a contagem de células como uma alternativa ao sistema convencional, câmara de Neubauer. O método é baseado na proporcionalidade entre o sinal de sulfato de bário e das células. Apesar das diferenças nas propriedades físicas, foi possível estabelecer uma relação entre os sistemas de fluxo. No sistema FIA para determinação de sulfato, foi obtida a seguinte equação para curva analítica: S = 0,0087Csulfato + 0,000458. Para o Saccharomyces cerevisiae a curva analítica obtida foi S = 4,01 x 10-11CS.cerevisiae + 0,0018 e a relação entre os sistemas foi CS.cerevisiae = 2,17 x 108CSulfato + 0,002258. Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 2,37 x 108 células L-1 e 7,90 x 108 células L-1. O método foi comparado com os resultados obtidos na câmara de Neubauer e não existiram diferenças significativas a um nível de confiança de 95% (teste-t pareado). A determinação com a câmara de Neubauer apresentou menor precisão que o sistema FIA. Além disso, o método permite a monitoração do crescimento microbiano. As principais vantagens do sistema FIA foram a alta freqüência, a seletividade, exatidão e repetibilidade satisfatórias
Acesso aberto (Open Access)
Avaliação do efeito da membrana de látex de Hevea brasiliensis no reparo de defeito da parede abdominal de rato
(Universidade Federal de Alfenas, 2007-02-15) Ferreira, Pablo Gomes; Gouvêa, Cibele Marli Cação Paiva; Araújo, Heloisa Sobreiro Selistre De; Fiorine, João Evangelista
A hérnia incisional (HI) é uma das complicações tardias das laparotomias, podendo acometer até 20% dos pacientes operados. A utilização de próteses representou um avanço sem precedentes no reparo da HI. Contudo, não há ainda tratamento ideal para o reparo e prevenção desse mal. A membrana de látex da seringueira demonstrou atividade cicatrizante e angiogênica em estudos in vitro e in vivo. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da membrana de látex sobre o reparo da parede abdominal lesada de ratos. Foram utilizados ratos machos Wistar com peso de 340 ± 20 g, nos quais foi induzido um defeito na parede abdominal de 1 x 2 cm, tendo a linha alba ao centro. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais: Controle (sem reparo) e Látex (reparo com a membrana) e submetidos à eutanásia aos 3, 5, 7 e 28 dias após a indução do defeito. Os fragmentos da parede abdominal foram retirados, divididos em duas partes e utilizados para análise histológica e bioquímica. A análise histológica revelou que o látex induziu a proliferação de vasos sangüíneos, o aumento de fibras musculares novas e a regeneração tecidual. Observou-se ainda o aumento da densidade de fibroblastos e deposição de colágeno, o que é importante para determinar o aumento da resistência a forças tensoras no tecido cicatricial, evitando a deiscência da ferida e a instalação da HI. Houve aumento gradual de deposição e organização das fibras colágenas durante o período de estudo. O látex induziu ainda a expressão dos fatores de crescimento celular, FGF-2 e TGFb; a diminuição da expressão de IGF e PDGF e não alterou a expressão de TGFa. A regeneração tecidual requer a influência de fatores de crescimento celular e uma seqüência de eventos celulares, que resultam na regulação celular, com proliferação, sobrevivência e diferenciação. Assim, a modulação de fatores de crescimento pela membrana de látex, parece ter contribuído positivamente para a regeneração do defeito da parede abdominal. Conclui-se que a membrana de látex da seringueira, quando usada para reconstrução da parede abdominal de ratos, permite a regeneração tecidual, a formação de tecido conjuntivo fibroso de reparação, podendo ser utilizada efetivamente na hernioplastia.