Mestrado em Ciências Farmacêuticas

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Navegando Mestrado em Ciências Farmacêuticas por Orientador(a) "Marques, Marcos José"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Análise de atividade esquistossomicida da 7-epiclusianona utilizando ferramentas bioquímicas e moleculares
    (Universidade Federal de Alfenas, 2016-02-24) Silva, Matheus Siqueira; Marques, Marcos José; Gadelha, Fernanda Ramos; Castro, Lívia De Figueiredo Diniz
    A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada, com alta morbidade e mortalidade, que afeta atualmente mais de 200 milhões de pessoas em todo o mundo, tendo o praziquantel (PZQ) como única opção de tratamento. Estudos descrevem várias cepas do parasito que são resistentes ao PZQ, fazendo-se necessário, estudos de novos medicamentos que possam ser utilizados no tratamento da esquistossomose. Um dos princípios do planejamento racional de fármacos consiste na escolha de alvos onde a droga produza efeito tóxico seletivo ao patógeno, e para isso é necessário definir o mecanismo de ação do fármaco proposto. A 7-epiclusianona (7-epi) é uma benzofenona que já teve atividade esquistossomicida descrita, tendo como critérios de eficácia a motilidade, danos no tegumento, acasalamento, postura de ovos, movimentação do sistema digestório e excretor. Neste sentido, o presente estudo analisou o impacto da 7-epi nos mecanismos de proteção dos vermes adultos de S. mansoni com o auxílio de ferramentas bioquímicas e biomoleculares. Uma investigação do grau de estresse oxidativo pela titulação de malondialdeído mostrou que a 7-epi na concentração de 12,5 μg/mL possui uma taxa de peroxidação lipídica no parasito reduzida quando comparada ao controle Kolliphor®, mas aumentada na concentração de 50 μg/mL (p < 0,001). De modo similar, quando se investigou a atividade no contexto ex vivo da superóxido dismutase (SOD), uma importante enzima detoxificadora do parasito, foi possível visualizar que a 7-epi interfere na sua atividade de forma significativa em relação aos controles RPMI 1640 e Kolliphor® à partir da concentração de 12,5 μg/mL (p < 0,001). Essa dosagem corresponde a 30% de inibição da atividade enzimática total em relação ao Kolliphor® e está muito próxima da dosagem de 7-epi que matou 90% dos parasitos (ED90=13,08 μg/mL) e na qual os danos no tegumento se apresentaram intensos. Complementarmente, na análise pelo docking molecular pode-se observar que a inibição da enzima não foi realizada diretamente no sítio, e que as melhores energias de interação com a 7-epi foram em uma cavidade próxima ao sítio e na junção dos monômeros. Finalmente, foram feitas análises quantitativas por qPCR do RNAm da SOD do parasito, cujos resultados não demonstraram mudança expressiva na transcrição da enzima após ação da 7-epi. Embora haja um impacto sobre a atividade da SOD do S. mansoni, este não parece ser o mecanismo principal de ação da 7-epi. Desta forma, é imprescindível a avaliação inibitória deste composto em outras enzimas do parasito, bem como a análise de outros mecanismos não enzimáticos que elucidem a ação da 7-epi em vermes adultos de S. mansoni.
    Schistosomiasis is a neglected tropical disease with high morbidity and mortality, which currently affects more than 200 million people worldwide, counting only with praziquantel (PZQ) as a treatment option. Studies describe various parasite strains that are resistant to PZQ, making it necessary, studies of new drugs that can be used to treat schistosomiasis. One of the principles of drugs rational planning is to choose targets where the drug produces selective toxic effects on the pathogen, and for this is necessary to define the action mechanism of the proposed pharmaco. 7-epiclusianone (7-epi) already has schistosomicidal activity described, using as criteria of effectiveness: the motility, integument damage, mating, egg-laying and motility of the digestive and excretory system. In this direction, the present study analyzed the impact of the 7-epi against the protective mechanisms of adult worms of S. mansoni with the support of biochemical and biomolecular tools. An investigation of the degree of oxidative stress by malondialdehyde titre showed that the 7-epi at a concentration of 12,5 μg/mL has lower levels of lipid peroxidation rate comparing to the Kolliphor® control, but increased in concentration of 50 μg/ml (p <0,001). Similarly, when it investigated the activity of superoxide dismutase (SOD), an important parasite detox enzyme, in ex vivo context it was possible to see the 7-epi interfere in its activity significantly, compared to controls RPMI-1640 and Kolliphor® at a concentration of 12,5 μg /mL (p <0,001). This value corresponds to 30% of the entire enzyme activity regarding Kolliphor® and is close to the effective dose that killed 90% of the parasites (ED90=13,08 μg/mL) in which integument damages were intense. In addition, the analysis by molecular docking can observe that the inhibition of the enzyme was not performed directly on site, and that the best interaction energies with 7-epi were in a cavity near the site and in the dimer’s junction. Finally, quantitative analyzes were made by qPCR of mRNA from SOD of the parasite, that results showed no significant change in enzyme transcription after the 7-epi action. Although there is an impact on the activity of SOD of S. mansoni, this does not seem to be 7-epi main mechanism of action. Thus, it is essential the inhibitory evaluation of this compound in other parasite enzymes as well as the analysis of other non-enzymatic mechanisms that elucidate the action of 7-epi in adult worms of S. mansoni.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação da atividade Leishmanicida de compostos organopaladados com ligantes nitrogenados e substituintes haletos e pseudohaletos
    (Universidade Federal de Alfenas, 2010-02-09) Franco, Lilian Pereira; Marques, Marcos José; Silva, Roberto Santana Da; Torres, Cláudia
    Leishmaniose é uma doença causada por um protozoário do gênero Leishmania. É considerada uma doença negligenciada, com altos índices em países em desenvolvimento. As opções de quimioterapia são limitadas e entre elas os problemas mais comuns são: a longa duração do tratamento, o alto custo, a resistência do parasito, a eficácia variável entre cepas ou espécies, os vários efeitos colaterais da droga e toxicidade. A necessidade de novos agentes terapêuticos seguros, efetivos e menos tóxicos é urgente. A co-infecção HIV/Leishmania tem aumentado ao redor do mundo, mudando a distribuição geográfica e a incidência da doença. O estudo da atividade de metais de transição tem sido realizado desde a descoberta da atividade antitumoral da platina (Pt) em 1965. Os complexos de paládio (II) têm se destacado especialmente por suas atividades biológicas variadas como antitumoral, atividade antiprotozoária, ação anti-inflamatória e atividade leishmanicida, além de apresentar menor toxicidade que a Pt. Devido à necessidade de novos agentes terapêuticos, doze novos complexos de paládio(II), obtidos a partir de dois ligantes iminicos, foram sintetizados e caracterizados por análise elementar, infravermelho (IR) e espectroscopia 1H RMN. A avaliação in vitro dos ligantes e complexos foi realizada sobre formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e sua citotoxicidade determinada em macrófagos murinos, através do teste MTT. A maioria dos complexos exibiram uma atividade leishmanicida que variou de 5,72-53,01 mg /mL para o IC50. A atividade dos ligantes foi melhorada após a coordenação com o paládio e a substituição por alguns radicais aumentaram ainda mais a atividade leishmanicida. Os compostos mais ativos foram o complexo de cloreto (serie A) e os complexos de tiocianato (serie A e B). Os resultados observados indicaram que os novos compostos além de apresentarem uma potencial atividade leishmanicida possuem menor citotoxicidade e maior índice de seletividade que a Pentamidina, droga de referência. Portanto, esses novos compostos são promissores agentes no tratamento contra a leishmaniose porém novas avaliações devem ser realizadas para determinação da toxicidade in vivo e mecanismo de ação.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Efeito de nanopartículas no tratamento da esquistossomose usando praziquantel como referência: uma revisão sistemática de evidência pré-clínica
    (Universidade Federal de Alfenas, 2024-03-08) Silva, Laís De Castro Carvalho; Marques, Marcos José; Malaquias, Luiz Cosme Cotta; Carvalho, Flávia Chiva De
    A esquistossomose é considerada uma das várias doenças tropicais negligenciadas, causada por vermes do gênero Schistosoma. O tratamento recomendado pela OMS é realizado com o medicamento praziquantel. Este medicamento possui baixa solubilidade e apresenta rápida metabolização pelo organismo em um composto menos ativo. Uma estratégia que vem sendo estudada para melhorar a biodisponibilidade de medicamentos pouco solúveis são as nanopartículas. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi realizar uma revisão sistemática de estudos in vivo, utilizando a metodologia PRISMA 2020. Para tanto foi feita uma comparação do tratamento experimental com praziquantel nanoestruturado (NE-PZQ) ao fármaco de referência, o praziquantel livre (L-PZQ), para verificar um eventual aumento da efetividade no tratamento da esquistossomose. A busca pelos artigos foi realizada nas bases de dados eletrônicas PubMed, Embase, Scopus e Web of Science. No total de 1.751 artigos analisados, 12 foram incluídos na revisão, os quais avaliaram nanopartículas dos tipos lipossoma, nanolipossoma funcionalizado com anticorpo, niossoma, nanocarreador de argila e de sílica, nanocápsula lipídica, nanopartícula lipídica sólida, carreador lipídico nanoestruturado e nanocristais, com o ativo praziquantel. Foram avaliados parâmetros parasitológicos, histopatológicos, farmacocinéticos e toxicológicos. No contexto geral, os dados parasitológicos demonstram que o tratamento com NE-PZQ proporcionou redução tanto a carga total de vermes quanto a carga tecidual de ovos. Os resultados do tratamento com NE-PZQ também demonstram uma alteração do perfil de oograma, com aumento de ovos mortos e diminuição de ovos imaturos e maduros. Nos parâmetros histopatológicos, o tratamento com NE-PZQ apresentou redução no número e diâmetro de granulomas quando comparado com L-PZQ. Os parâmetros farmacocinéticos e toxicológicos demonstram que NE-PZQ possui maior biodisponibilidade e menor toxicidade. Portanto, os artigos revisados demonstraram a possibilidade de melhora na atividade do PZQ pela utilização de nanopartículas, assim como foi evidenciado que o tipo de carga das nanopartículas pode influenciar no desfecho dos parâmetros analisados. A melhora da eficácia terapêutica foi reafirmada pelos fatores farmacocinéticos, resultando em maior biodisponibilidade. Mesmo com o prolongamento no tempo de permanência na circulação sistêmica, as nanopartículas demonstraram um perfil de menor toxicidade.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Efeito leishmanicida de derivados benzofenônicos e estudo comparativo do potencial de inibição enzimática in silico e in vitro
    (Universidade Federal de Alfenas, 2013-02-19) Almeida, Letícia De; Marques, Marcos José; Coimbra, Elaine Soares; Viegas Junior, Cláudio
    As leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania e apresentam diversas manifestações clínicas, sendo consideradas uma doença tropical negligenciada. Encontram-se atualmente presentes em 88 países, afetando 12 milhões de pessoas, com dois milhões de novos casos por ano. O tratamento das leishmanioses é realizado até hoje pelos mesmos quimioterápicos usados na década de 40, apesar da persistência dos efeitos colaterais. Neste sentido, o objetivo do trabalho consistiu na avaliação da atividade de derivados de benzofenonas em L. (L.) amazonensis. Além de buscar entender possíveis mecanismos de ação, através da avaliação da dosagem de óxido nítrico e do potencial de inibição enzimática nos contextos in silico e in vitro. Foram testados três benzofenonas precursoras (CM-A, CM-B e CM-C) comercialmente disponíveis e nove derivados (LFQM-115, LFQM-116, LFQM-117, LFQM-118, LFQM-119, LFQM-120, LFQM-121, LFQM-122 e LFQM-123). Inicialmente os testes foram realizados em formas promastigotas de L. (L.) amazonensis, apesar de todos os derivados serem mais eficazes que seus precursores, os melhores resultados foram exibidos por LFQM-115, LFQM-118 e LFQM-123 (IC50-PRO = 4,90; 5,05 e 5,94 μg/mL; respectivamente). A toxicidade a macrófagos peritoniais murinos foi também avaliada, e constatou-se que os derivados LFQM-117, LFQM-120, LFQM-121, LFQM-122 e LFQM123 foram os menos citotóxicos (CC50 = 140,06; 87,10; 116,20 e >160,00 μg/mL; respectivamente). A avaliação de atividade em formas amastigotas de L. (L.) amazonensis procedeu-se apenas com os derivados, sendo LFQM-120 o mais efetivo em formas intracelulares. O QlogP dos derivados de benzofenonas pode ser correlacionado com a atividade antipromastigota, bem como com a antiamastigota. A partir de então, os derivados que mostraram melhor perfil de atividade em ambas as formas do parasito e em macrófagos murinos foram selecionados (LFQM-116, LFQM-117, LFQM-119, LFQM-120 e LFQM-121) para os demais ensaios. Foi realizada a dosagem da produção de óxido nítrico (NO) nos sobrenadantes de cultura de macrófagos peritoneais murinos infectados com L. (L.) amazonensis. Neste verificou-se que os derivados benzofenônicos LFQM-119 e LFQM-120 estimularam a produção de NO, porém apenas o derivado LFQM-120 induziram uma produção de NO equivalente ao produzido por LPS. Algumas enzimas importantes para tripanossomatídeos (cruzaína, oligopeptidase B, ornitina descarboxilase e tripanotiona redutase) e representantes de importantes famílias de enzimas (papaína e tripsina) foram usadas na análise por docking molecular. Algumas destas foram também utilizadas para a avaliação do potencial de inibição enzimática experimental (papaína, cruzaína, tripsina e oligopeptidase B), tendo o derivado LFQM-116 exibido valores de IC50 = 7,54; 8,44; 8,59 e 14,25 μg/mL; respectivamente. Adicionalmente, é possível verificar a ação multi-alvo do derivado LFQM-120. Portando, este trabalho mostrou a ação de derivados de benzofenonas em ambas as formas de L. (L.) amazonensis, descrevendo ainda o ganho na atividade biológica com as modificações estruturais feitas em seus precursores. Além de ajudar a entender possíveis mecanismos de ação de tais compostos e ainda possibilitar a seleção dos compostos mais efetivos in vitro, os quais poderão então ser utilizados em futuros testes in vivo.