Doutorado em Biociências Aplicadas à Saúde

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Navegando Doutorado em Biociências Aplicadas à Saúde por Orientador(a) "Gamero, Angel Mauricio Castro"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Análise da ação do canabidiol no modelo experimental de distrofia muscular de Duchenne
    (Universidade Federal de Alfenas, 2024-07-03) Ferreira, Laís Leite; Gamero, Angel Mauricio Castro; Ionta, Marisa; Silva, Marcelo Aparecido Da; Aissa, Alexandre Ferro; Moraes, Luís Henrique Rapucci
    A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é um distúrbio genético grave, ligada ao cromossomo X, que causa degeneração progressiva da musculatura esquelética. O canabidiol (CBD) exerce diversos efeitos benéficos, incluindo propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes. Diante do potencial ação benéfica do CBD, neste estudo verificamos o efeito in vitro do óleo de CBD full spectrum na viabilidade da fibra muscular distrófica e do efeito in vivo na hepatoxicicidade, mionecrose, inflamação e estresse oxidativo do modelo de DMD. Para análise in vitro, utilizouse células distróficas de camundongos mdx, tratadas com CBD full spectrum e foi avaliada a viabilidade celular por MTT. Na análise in vivo utilizou-se duas linhagens de camundongos sendo uma C57BL/10 (BL10) e a outra linhagem de camundongo mdx, esta última dividida em três grupos, sendo o primeiro grupo tratado com salina (mdxSAL; n=7), o segundo grupo tratado com óleo de semente de uva (mdxOU; n=7) e o terceiro grupo tratado com óleo de CBD full spectrum (mdxCBD; n=7) 10mg/Kg durante 14 dias. Após o tratamento, foi analisado o biomarcador Creatina quinase (CK) pelo sangue, a histomorfometria dos hepatócitos e os níveis de glicogênio hepático, além da histopatologia dos músculos diafragma (DIA) e quadríceps (QUA), analisando fibras mionecróticas, processos inflamatórios e o estresse oxidativo. No estudo in vitro, óleo de CBD full spectrum produziu efeito citotóxico de maneira dosedependente nas células musculares de camundongos distróficos. No estudo in vivo, o tratamento com óleo de CBD full spectrum aumentou o glicogênio hepático produzindo melhorias do fenótipo distrófico do camundongo mdx. Na análise dos músculos DIA e QUA, o tratamento com óleo de CBD full spectrum, preveniu o processo da mionecrose, reduzindo os níveis séricos de CK, a presença de núcleos centrais e marcação positiva ao IgG no tecido muscular distrófico. Preveniu a inflamação, reduzindo a área inflamatória, a presença de macrófagos e os níveis de NF-κB. Além disso, preveniu o estresse oxidativo, aumentando a ação antioxidante das moléculas CAT e GSH e evitou a instalação e exacerbação precoce do estresse oxidativo ainda em estágios iniciais da doença, com a diminuição da lipofuscina no músculo distrófico dos camundongos mdx. O tratamento com de óleo de CBD full spectrum demonstrou ser seguro e eficaz na redução dos parâmetros diretos e indiretos de avaliação da miopatia da DMD em estágio iniciais da doença. Os resultados indicam que o óleo de CBD full spectrum pode representar uma nova abordagem promissora para tratamento da DMD.
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    ItemEmbargo
    Papel do WT161, inibidor específico da hdac6, sobre a progressão tumoral e instabilidade cromossômica em glioblastoma
    (Universidade Federal de Alfenas, 2025-02-07) Oliveira, Leilane Sales De; Gamero, Angel Mauricio Castro; Silva, Luciana Maria; Vieira, Társis Antônio Paiva; Leopoldino, Andreia Machado; Oliveira Júnior, Robson José De
    O Glioblastoma (GBM) é considerado a forma mais agressiva e comum de tumores cerebrais em adultos, e de pior prognóstico com uma sobrevida média de cerca de quinze meses. Atualmente, o tratamento do GBM envolve ressecção cirúrgica seguido por radioterapia concomitante à administração de temozolomida (TMZ), porém a heterogeneidade genética e celular e/ou a falha das vias de reparo de DNA nesse tipo tumoral conferem elevada resistência ao quimioterápico. Dessa forma, faz-se necessário o aprimoramento das estratégias das terapias convencionais. O controle epigenético aberrante é um evento precoce da progressão tumoral, na qual a enzima histona desacetilase 6 (HDAC6) desempenha um papel crucial modulando a função de proteínas histônicas, além de proteínas não histônicas e fatores de transcrição tais como E2F, p53, c-Myc, NF-κB. Nesse contexto, surgem os inibidores de HDAC6 como possíveis agentes antitumorais, por exemplo o composto WT161, cujo potencial antiproliferativo tem sido evidenciado em alguns tipos de câncer, como retinoblastoma, osteosarcoma, mieloma múltiplo e câncer de mama. Assim, a presente pesquisa busca investigar a ação antitumoral de WT161 de forma isolada ou combinada com TMZ sobre a progressão tumoral e instabilidade cromossômica (CIN) em linhagens celulares de GBM, U251, U87 (sensíveis à TMZ) e T98G (resistente à TMZ). A avaliação da eficiência antiproliferativa de WT161 se deu utilizando o ensaio com MTT. Na análise de combinação de drogas foram empregadas diferentes estratégias de administração (simultânea e sequencial), baseadas no método de Chou-Talalay. WT161 diminuiu significativamente a proliferação celular das linhagens de GBM de forma isolada, e de forma sinérgica, quando combinado de forma simultânea com TMZ, para todas as células investigadas. Os ensaios de clonogenicidade mostraram que a capacidade das células formarem colônias foi eficientemente inibida pelo tratamento. De forma interessante, esses resultados ainda foram corroborados em modelos de cultura tridimensional (3D) das células U251 e T98G. Além disso, WT161 provocou apoptose e parada do ciclo celular na fase G2/M, além de reduzir significativamente a atividade migratória (2D e 3D) e invasiva das linhagens de GBM. Esses dados foram acompanhados com o aumento da expressão da proteína α-tubulina acetilada comprovando a efetiva inibição de HDAC6, aumento da clivagem da proteína marcadora de apoptose PARP e redução dos níveis de β-catenina, após exposição a WT161. Desde o ponto de vista cromossômico, WT161 induziu aumento significativo da quantidade de micronúcleos, pontes nucleoplasmáticas, metáfases desalinhadas e fusos multipolares, além de promover aneuploidia nas células T98G, identificados pelo ensaio de micronúcleos com bloqueio de citocinese, ensaio de erros mitóticos, e hibridização in situ por fluorescência (FISH), demonstrando o aumento da CIN dessas células após inibição de HDAC6. Finalmente, WT161 alterou a dinâmica metabólica da linhagem T98G. Destacamos assim, o importante papel biológico de HDAC6 sobre o fenótipo neoplásico, afetando especialmente os perfis de progressão tumoral e CIN, e apontamos o potencial terapêutico de WT161 como promissor agente anti-GBM.