Mestrado em Ciências Biológicas

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Navegando Mestrado em Ciências Biológicas por Orientador(a) "Marques, Marcos José"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação da atividade leishmanicida de compostos orgânicos contendo prata em sua estrutura
    (Universidade Federal de Alfenas, 2017-07-25) Espuri, Patrícia Ferreira; Marques, Marcos José; Almeida, Letícia De; Caldas, Ivo Santana
    As leishmanioses são um conjunto de doenças cuja maioria tem caráter zoonótico e são causadas por protozoários parasitos do gênero Leishmania, além de ameaçarem cerca de 350 milhões de indivíduos em 98 países. O tratamento é feito à base de antimoniais pentavalentes desde a década de 40, anfotericina B e pentamidina, porém a toxicidade destes, a persistência dos efeitos colaterais e a duração do tratamento são as principais dificuldades na terapia dos pacientes que apresentam tal doença. Neste contexto, a busca de novos fármacos menos tóxicos e mais eficazes é de extrema importância. Como há relatos na literatura de que a associação compostos de prata e ligantes diimínicos apresenta atividade leishmanicida, o presente estudo avaliou a atividade anti-Leishmania in vitro e in vivo de compostos orgânicos contendo este metal em sua estrutura (JB3, JB4, JB5, JB5SF e JB6), além dos ligantes 2-tionaimidazolina e fenantrolina e os prováveis mecanismos de ação. Para tanto, foram feitas análises das atividades leishmanicidas em promastigotas e amastigotas, no contexto in vitro, para a determinação do IC50, além da citotoxicidade em macrófagos peritoneais murinos para determinação do CC50. Para avaliar os possíveis mecanismos de ação destes compostos, foram feitos ensaios de inibição enzimática, utilizando isoforma r-CPB2.8; eletroforese para avaliar degradação do DNA; microscopia de força atômica e dosagem de óxido nítrico. Para análise in vivo foi utilizado PCR em tempo real para quantificar a carga parasitária de hamsters infectados com L. (L.) infantum chagasi após tratamento experimental. O composto que apresentou melhores resultados sobre atividade anti-promastigota e anti-amastigota de L. (L.) amazonensis (8,06 μg/mL, 1,30 μg/mL, respectivamente) e L. (L.) infantum chagasi (1,46 μg/mL, 8,21 μg/mL, respectivamente) foi o JB5, e o que apresentou menor toxicidade foi o 2-tionaimidazolina. Como alguns compostos apresentaram uma toxicidade considerável, avaliou-se este parâmetro no ligante fenantrolina e obteve-se CC50 = 30,80 μg/mL, concluindo que este contribui consideravelmente para a toxicidade dos compostos. Com isso, avaliou-se a atividade leishmanicida contra as formas do parasito do JB5SF (sem o grupamento fenantrolina) e obteve-se IC50 de 1,80 e 8,91 μg/mL. Apesar do 2-tionaimidazolina ter sido o de menor toxicidade não foi tão eficiente para reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais quanto o Glucantime. Contudo, o composto JB5SF que apresentou o maior índice de seletividade (40,34) foi capaz de reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais, apresentando estatística semelhante, no fígado comparado com o fármaco de referência. Os compostos não apresentaram atividade inibitória significativa frente à cisteíno proteases (rCPB2.8) e nem degradação do DNA do parasito. Especificamente o JB5SF na concentração de 5,0 μg/mL não produziu modificações na membrana do protozoário e não alterou significativamente a área da superfície do macrófago infectado. Todavia, o JB5SF na concentração de 10,0 μg/mL e associado ao LPS levou o macrófago infectado a uma maior produção de NO quando comparado ao não tratado. Embora não tenha sido definido o mecanismo de ação do composto sobre o parasito pode-se inferir que o mesmo pode contribuir com a resposta imune estimulando as células macrofágicas no processo de fagocitose.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação da atividade leishmanicida no contexto in vivode compostos análogos da miltefosina
    (Universidade Federal de Alfenas, 2018-07-17) Silva, Joana Carolina Da; Marques, Marcos José; Laurenti, Márcia Dalastra; Castro, Lívia De Figueiredo Diniz
    O tratamento quimioterápico de referência no Brasil para as leishmanioses são os antimoniais pentavalentes, que estão em uso a mais de 40 anos, e já não são mais eficazes o bastante para controlar a Leishmaniose Visceral (LV) em todo mundo. O uso de medicamentos de segunda escolha, tais como Anfotericina B, Pentamidina e Miltefosina têm sido estratégicos no tratamento da LV. Neste contexto, a síntese de novos compostos por meio de bioisosterismo tem sido aplicada. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial terapêutico dos compostos Alquiltriazol (Composto C11) e Alquilfosfocolínico (Composto C4) ambos análogos da Miltefosina, em hamsters dourados (Mesocricetus auratus) infectados com L. (L.) infantum chagasi. Os animais foram infectados por via intraperitoneal com 1x107 amastigotas e após 60 dias de infecção foram tratados por 10 dias com 25mg/kg de C11 e C4 por gavagem e 50mg/kg de Glucantime (GLU) por via intraperitoneal. Ao fim do tratamento os animais foram eutanasiados e prosseguido da coleta de fígado e baço para carga parasitária por qPCR; análises histopatológicas e expressão de citocinas IL-10, IL-4, IL-17, TNF-α, TGF-β, INF-Υ por RTqPCR no baço. Os animais tratados com C11 e C4 não apresentaram uma redução significativa da carga parasitária quando comparados com o grupo infectado e não tratado (INT) (p>0,05). Mas foi possível observar que não houve uma diferença significativa entre a carga parasitária do fígado dos animais tratados com C11 e GLU (p>0.05). Histologicamente os animais tratados com C11 apresentaram uma maior preservação da relação de Polpa Branca (PB) e Polpa vermelha (PV), mantendo mais de 50% da polpa branca comparada a 9% do grupo INT, em relação ao saudável. A análise de expressão gênica da citocinas mostrou uma relação de resposta imunológica dos animais tratados com C11, onde observamos um aumento da expressão de IL-17 e TNF-α e redução da expressão de IL-10 comparados com INT (p<0,05). Estes dados indicam que o C11 pode ser um promissor composto a ser usado no tratamento da LV, uma vez que apresentou alguns resultados positivos contra a doença no modelo experimental em hamster.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação in vitro de derivados triazólicos quanto atividade leishmanicida em Leishmania (L) amazonensis e Leishmania (L) infantum chagasi
    (Universidade Federal de Alfenas, 2022-04-25) Toledo, Paula Pereira Marques; Marques, Marcos José; Nunes, Juliana Barbosa; Faria, Angélica Rosa
    As Leishmanioses são consideradas doenças negligenciadas sendo causadas pelo protozoário do gênero Leishmania sp. e transmitida através do repasto sanguíneo do inseto vetor do gênero Lutzomyia. A terapêutica contra leishmaniose é limitada. Assim, a descoberta de novos fármacos poderia ser uma boa estratégia. Os triazois são fármacos seguros e bem tolerados, com baixa toxicidade e apresentam um amplo espectro de ação. Por tanto, o presente estudo tem como objetivo testar a avaliar in vitro compostos derivados de triazois em relação a atividade leishmanicida, nas formas amastigota e promastigota em Leishmania (L) amazonensis e L. (L) infantum chagasi. E foram testadas a toxicidade dos compostos diante de células de mamíferos. Ambos experimentos comparando os valores com o fármaco padrão Anfotericina B (ANB). Os compostos, também foram avaliados quanto à farmacocinética e à ‘regra dos cinco’ de Lipinski, além da realização do docking molecular. Os compostos mais bem avaliados foram FS33 e FS41 apresentando concentração efetiva 50 de 2,71 e 4,71 µg/mL respectivamente para L. amazonensis e FS71 e FS54 com 1,24 e 0,8 µg/mL respectivamente para L. chagasi, também apresentaram as maiores concentrações citotóxicas 50 em comparação com ANB (p<0,05). A avaliação antiamastigota contra L. amazonensis apontou o FS35 e FS28 como os mais ativos 1,1 E 0,9 µg/mL, com valores de Índice de seletividade de 18,4 e 128,9 respectivamente e em L. chagasi o composto mais ativo foi FS44 com 3,1 µg/mL com 20,1 de IS. O ensaio de peroxido de Hidrogênio demonstrou que os compostos analisados diminuem sua liberação (FS17, FS44, FS54). O docking molecular demonstrou que três compostos podem inibir Glicose-6-fosfato desidrogenase. As previsões ADME, demonstraram que os compostos podem apresentar interações adequadas com o organismo humano, pois inibem menos proteínas do citocromo P450, e em geral apresentam alta absorção gastrointestinal e a avaliação quanto à ‘regra dos cinco’ de Lipinski também mostrou que estes compostos podem ser administrados por via oral em futuros ensaios in vivo. Assim, de modo geral os derivados analisados podem ser promissores no tratamento de Leishmaniose.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação in vitro e in silico da atividade esquistossomicida de derivados eugenólicos utilizando ferramentas bioquímicas, moleculares e morfológicas
    (Universidade Federal de Alfenas, 2020-02-28) Souza, Isabella Maria Monteiro De; Marques, Marcos José; Barros, Gérsika Bitencourt Santos; Souza, Raquel Lopes Marns
    A esquistossomose é uma doença parasitária crônica causada por parasitos do gênero Schistosoma. Atualmente, a quimioterapia é o recurso imediato para minimizar a prevalência e incidência desta doença em todo o mundo, e o único medicamento indicado para o tratamento é o praziquantel (PZQ). No entanto, a dependência de um único fármaco é preocupante, principalmente em áreas endêmicas, onde a quimioterapia repetitiva é constante, podendo favorecer o aparecimento de cepas resistentes ao medicamento. Na literatura já foram relatadas algumas competências do eugenol, tais como atividades antibacterianas e antiparasitárias. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade in vitro de derivados eugenólicos sobre os vermes adultos do Schistosoma mansoni utilizando ferramentas bioquímicas e morfológicas; além da análise in silico, a fim de elucidar o mecanismo de ação destes compostos sobre o parasito. Desta forma, o uso de diferentes técnicas auxiliou a elucidar o meio pelo qual os derivados eugenólicos agiam sobre o verme. Após realização do screening com diversos derivados eugenólicos em diferentes doses, selecionou-se três compostos e determinou-se assim seu ED50, sendo, portanto, FB1 (62,19µg/ml), FB4 (41,04µg/ml) e FB9 (100,67 µg/ml). Assim, foi feita uma análise biomolecular sobre o sistema excretor e lesão de tegumento do parasito utilizando microscopia de fluorescência e eletrônica de varredura. Além disso, foram realizados ensaios bioquímicos com o verapamil e a ouabaína, antagonistas dos canais de cálcio e da bomba Na+ K+ ATPase, respectivamente. Complementarmente, foram realizadas análises in silico para avaliar a interação dos derivados em questão e estes canais. Os derivados eugenólicos provocaram lesão no tegumento e no sistema excretor dos vermes adultos de S. mansoni, fato comprovado através das sondas fluorescentes de marcação e microscopia eletrônica de varredura, principalmente o derivado FB4 na concentração 80 µg / mL. Além disso, pôde-se observar o retardamento da morte dos vermes adultos comparando presença/ausência de ouabaína, 192/72h; 192/168h associado ao FB1 e FB9, respectivamente. Por outro lado, não se viu alterações quando em contato com o antagonista do canal de cálcio, que somente inibiu a ação do PZQ. Sendo assim, um dos prováveis mecanismos de ação dos derivados eugenólicos está relacionado com a inibição do canal de sódio, o que pode estar relacionado com o que já foi descrito para os compostos eugenólicos. Foi observado que o composto que melhor interagiu com estes canais foram o FB1 e FB9, mas foram os que apresentaram maior ED50 e os de menor efeito no tegumento dos vermes adultos. De modo oposto o derivado FB4 foi o que menos interagiu no contexto in silico e o de menor ED50 e maior efeito no tegumento. Desta forma podese concluir que os derivados eugenólicos atuam sobre o parasito de forma mais ativa quando atuam no tegumento dos vermes adultos do S. mansoni.
    Schistosomiasis is a chronic parasitic disease caused by parasites of the genus Schistosoma. Currently, chemotherapy is the immediate resource to minimize the prevalence and incidence of this disease worldwide, and the only medication indicated for treatment is praziquantel (PZQ). However, the dependence on a single drug is worrying, especially in endemic areas, where repetitive chemotherapy is constant, which may favor the appearance of strains resistant to the drug. Some competences of eugenol have been reported in the literature, such as antibacterial and antiparasitic activities. In this sense, this work aimed to evaluate the in vitro activity of eugenolic derivatives on adult worms from Schistosoma mansoni using biochemical and morphological tools; in addition to in silico analysis, in order to elucidate the mechanism of action of these compounds on the parasite. In this way, the use of different techniques helped to elucidate the means by which the eugenolic derivatives acted on the worm. After performing screening with different eugenolic derivatives at different doses, three compounds were selected and their ED50 was thus determined, thus being FB1 (62.19µg / ml), FB4 (41.04 µg / ml) and FB9 (100, 67 µg / ml). Thus, a biomolecular analysis was performed on the excretory system and skin damage of the parasite using fluorescence microscopy and scanning electron. In addition, biochemical tests were performed with verapamil and ouabain, antagonists of the calcium channels and the Na + K + ATPase pump, respectively. In addition, in silico analyzes were carried out to evaluate the interaction of the derivatives in question and these channels. The eugenolic derivatives caused damage to the tegument and the excretory system of the adult worms of S. mansoni, a fact confirmed by the fluorescent marking probes and scanning electron microscopy, mainly the FB4 derivative at 80 µg / mL concentration. In addition, it was possible to observe the delay in the death of adult worms by comparing the presence / absence of ouabain, 192 / 72h; 192 / 168h associated with FB1 and FB9, respectively. On the other hand, no changes were seen when in contact with the calcium channel antagonist, which only inhibited the action of PZQ. Thus, one of the likely mechanisms of action of eugenolic derivatives is related to sodium channel inhibition, which may be related to what has already been described for eugenolic compounds. It was observed that the compound that best interacted with these channels were FB1 and FB9, but they were the ones that had the highest ED50 and those with the least effect on the coat of adult worms. Conversely, the FB4 derivative was the one that least interacted in the in silico context and the one with the lowest ED50 and the greatest effect on the integument. In this way, it can be concluded that the eugenolic derivatives act on the parasite more actively when they act on the integument of the adult worms of S. mansoni.