Mestrado em Ciências Biológicas

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Navegando Mestrado em Ciências Biológicas por Orientador(a) "Caldas, Ivo Santana"

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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação de híbridos de metronidazol no tratamento da doença de Chagas experimental
    (Universidade Federal de Alfenas, 2022-08-23) Benedetti, Monique Dias; Caldas, Ivo Santana; Vashist, Usha; Santos, Fabiane Matos Dos
    A doença de Chagas possui como um de seus principais desafios o desenvolvimento de um fármaco que seja efetivo em todas as fases da doença e com baixa toxicidade, uma vez que os atuais não suprem essas necessidades. Uma das estratégias de planejamento de fármacos, é a hibridização molecular, que pode reduzir os efeitos colaterais e melhorar a afinidade e eficácia em relação aos compostos isolados. Dessa forma o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade anti-T. cruzi de novos compostos híbridos de metronidazol acoplados com derivados de eugenol com testes in vitro e in vivo. Previamente a este trabalho, 21 compostos foram avaliados em testes in vitro frente às formas epimastigotas e tripomastigotas de T. cruzi para avaliação da eficácia contra o parasito (definição do IC 50 ) e toxicidade dos compostos (CC 50 ). Os três compostos com melhores resultados no experimento in vitro (CEI02, CEF05 e MG02), foram testados em experimento de triagem in vivo para definição do composto com melhor atividade, menor toxicidade e a dosagem mais otimizada do mesmo, em experimento de maior duração e em terapia combinada com Bz, além disso, CEF05 foi testado contra formas amastigotas. Neste experimento final, foram avaliados parâmetros de eficácia terapêutica, biológicos, imunológicos e histológicos. Os resultados obtidos a partir dos testes in vitro demonstram que todos os compostos apresentaram atividade tripanocida contra o parasito e apresentaram satisfatório grau de toxicidade, sendo MG02 o composto mais satisfatório. Na triagem in vivo foi demonstrado que o melhor resultado na redução da parasitemia foi o do híbrido CEF05 nas dosagens de 50 e 100mg/kg, que foi o único a prevenir a morte de todos os animais e com menor perda de peso. Foi possível observar, a partir do resultado do experimento in vitro contra formas amastigotas que o híbrido apresentou resultados superiores ao benznidazol. A partir dos resultados do experimento in vivo final, a monoterapia de CEF05 não eliminou o T. cruzi dos hospedeiros, porém reduziu a parasitemia dos animais, evitou a mortalidade, reduziu a perda peso dos animais e reduziu os infiltrados inflamatórios do coração dos camundongos e a produção de citocinas pró- inflamatórias, além de potencializar o efeito tripanocida do Bz verificado através da parasitemia. Com os resultados obtidos, é possível concluir que apesar de a maior atividade nos testes in vitro ter sido observada com a utilização do MG02, melhores resultados foram observados in vivo com a utilização do híbrido CEF05 que se destacou pela maior atividade contra T. cruzi e redução dos efeitos tóxicos.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Avaliação do efeito do composto 4-nitrobenzoilcumarínico em camundongos experimentalmente infectados por Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de Alfenas, 2019-08-19) Vilas Boas, Diego Fernandes; Caldas, Ivo Santana; Saraiva, Maurício Frota; Colombo, Fábio Antônio
    Estudos prévios mostram que compostos cumarínicos apresentam atividades anticancerígenas e antiparasitárias e recentemente foi demonstrada importante atividade in vitro do composto 4-nitrobenzoilcumarínico (4NBC) especificamente contra o Trypanosoma cruzi. Este trabalho descreve o efeito do tratamento com 4NBC em monoterapia e combinado com benznidazol em camundongos experimentalmente infectados pela cepa Y do T.cruzi. Foram utilizados 56 camundongos Swiss, divididos em 8 grupos. O índice de cura foi verificado pela reativação natural da parasitemia, hemocultura e qPCR. Para verificação do possível efeito tóxico do 4NBC, os camundongos foram pesados semanalmente e foi realizada a dosagem de AST e ALT como marcadores de toxicidade hepática e análise do tecido hepático. Para avaliar a resposta imune humoral, foram quantificados anticorpos da classe IgG e os isotipos IgG1, IgG2a e IgG2b. Ao final do experimento os animais foram eutanasiados e o tecido cardíaco foi utilizado para análise da miocardite. Todos os esquemas terapêuticos foram eficazes em prevenir a morte de 100% dos animais. De forma geral, o tratamento foi bem tolerado pelos animais, evidenciado pelo acompanhamento do peso, pela dosagem das enzimas AST e ALT e pela análise do tecido hepático. O benefício da utilização da cumarina em monoterapia ou em combinação foi evidenciado pela redução da área sob a curva de parasitemia em relação aos animais infectados e não tratados. Só foi observada cura parasitológica entre os animais tratados com Bz em monoterapia e na combinação de 100mg/kg de 4NBC com 50mg/kg de Bz. Todas as combinações de Bz com 4NBC se mostraram mais eficazes na prevenção da miocardite e redução da produção de IgG e IgG2a, se comparados com o grupo tratado com 50mg/kg de Bz. Os resultados obtidos mostram que o composto 4NBC apresenta atividade tripanocida, que é bem tolerado pelo hospedeiro e que este pode interferir positivamente na prevenção da miocardite típica da doença de Chagas.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Influência da infecção crônica por Schistosoma mansoni na resposta à quimioterapia específica contra a infecção experimental aguda por Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de Alfenas, 2021-06-25) González Lozano, Kelly Joanna; Caldas, Ivo Santana; Guedes, Paulo Marcos Da Matta; Castro, Aline Pereira
    O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta do tratamento com benznidazol (BZL) na infecção aguda por Trypanosoma cruzi, em camundongos com infecção crônica por Schistosoma mansoni. Foram utilizados 66 camundongos fêmeas Balb/c divididos em 6 grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1): Saudáveis, grupo 2 (G2): infectados por S. mansoni, grupo 3 (G3): infectados por T. cruzi, grupo 4 (G4): infectados por T. cruzi e tratados com BZL, grupo 5 (G5): coinfectados por S.mansoni/T.cruzi e grupo 6 (G6): coinfectados por S.mansoni/T.cruzi e tratados com BZL. Foram registrados os pesos, a mortalidade e a parasitemia dos animais e ao final do experimento foi coletado sangue para dosagem do BZL e análises de citocinas. Após, os animais foram eutanasiados para coleta de órgãos que foram pesados e fixados para análises histológicas. Análises de parasitismo cardíaco por qPCR também foram realizados. Os resultados mostraram que os animais coinfectados apresentaram parasitemia até 5 vezes maiores daquelas observadas entre os camundongos infectados apenas com o T. cruzi (G5: 6x106 vs. G3: 1.3x106 tripomastigotas /0,1mL de sangue; p<0.05), mas após o pico de parasitemia os animais coinfectados controlaram o parasitismo no miocárdio de forma mais eficaz ao G3 (G5: 39.48 vs. G3: 158.6 parasitos/25ng DNA tecidual; p<0.05). Apesar da menor carga parasitária no miocárdio dos animais coinfectados no 13o dia de infecção por T. cruzi, a miocardite foi mais elevada nestes animais (G5: 284 vs. G3: 246 números de células no miocárdio; p<0.05). O BZL, como esperado, controlou a parasitemia do T. cruzi entre os animais do G4, mas também foi eficiente em controlar a parasitemia mesmo entre os animais coinfectados pertencentes ao G6 (G4: 325 e G6: 417 média de tripomastigotas/0,1mL de sangue; p>0.05). A avaliação do peso corporal e mortalidade também mostrou que o BZL promoveu melhora destes parâmetros entre os camundongos do G6 quando comparados com os animais coinfectados do G5, da mesma forma como ocorreu com a avaliação do parasitismo cardíaco e miocardite (G5 vs. G6, p<0.05). A coinfecção reduziu a polarização dos perfis anti e pró- inflamatórios das citocinas induzidas pelos parasitos quando em situação de infecção simples e o BZL promoveu diminuição de citocinas antiinflamatórias em animais coinfectados sem efeito nas citocinas proinflamatórias. Os pesos do fígado e do baço foram exacerbados em animais coinfectados quando comparado com os outros grupos experimentais (p<0.05). O BZL normalizou o peso do baço, ajudou a evitar a perda de hepatócitos e minimizou a inflamação no fígado (G5 vs. G6, p<0.05), mas aumentou a hepatomegalia nos animais do G6 (G5: 0.089 vs. G6: 0.10g peso relativo médio do fígado; p<0.05). A coinfecção ou o BZL não influenciaram no número de granulomas hepáticos, em sua área ou densidade celular (G5 e G6 vs. G2, p>0.05), mas entre os coinfectados houve aumento das porcentagens de animais com granulomas pulmonares (G2: 40, G5: 60 e G6: 89% de animais com granulomas no pulmão) e intestinais (G2: 50, G5: 90 e G6: 75% de animais com granulomas intestino delgado). Todos os grupos com esquistossomose mostraram alta inflamação no intestino delgado, sem comprometimento significativo do intestino grosso. Por fim, a quantificação do BZL revelou que a coinfecção não influencia de forma significativa nos níveis do fármaco no sangue nos tempos testados (G4 vs. G6, p>0.05). Os resultados permitem concluir que o tratamento com BZL é eficiente em minimizar a perda de peso corporal, mortalidade e esplenomegalia, além de suprimir o parasitismo e parasitemia de T. cruzi em camundongos coinfectados cronicamente com S. mansoni.
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    ItemAcesso aberto (Open Access)
    Influência dos tratamentos com Lactonas Sesquiterpênicas isoladas de Tithonia diversifolia, em monoterapia e combinadas ao benznidazol, durante infecção aguda experimental por Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de Alfenas, 2018-02-26) Santos, Elda Gonçalves Dos; Caldas, Ivo Santana; Almeida, Létícia De; Marques, Marcos José
    De acordo com a Organização Mundial de Saúde, a doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, ainda faz parte do grupo de doenças negligenciadas, uma vez que ainda são escassos os investimentos destinados às pesquisas para desenvolvimento de novas drogas, de modo que as opções terapêuticas são limitadas. Sendo assim, é evidente a necessidade de estudos com a finalidade de desenvolver novos medicamentos eficazes na quimioterapia da doença. A espécie Tithonia diversifolia, o margaridão, é uma planta considerada invasora no Brasil, sendo encontrada ao longo de rodovias e em terrenos baldios. As lactonas sesquiterpênicas (LSTs) isoladas desta planta, possuem ação anti-inflamatória e anti-parasitária, dentre outras ações farmacológicas. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade tripanocida in vitro do extrato de lavagem foliar rico em LSTs (ELF) e da tagitinina C (TC) extraídos de T. diversifolia, isolados e em combinação com benznidazol (Bz). Adicionalmente, foi avaliado o potencial dos tratamentos, em monoterapia e combinados, em relação à capacidade de induzir a cura parasitológica, prevenir ou reduzir o índice de miocardite e suas influências na resposta imune celular e humoral de animais experimentalmente infectados pela cepa Y do T.cruzi. Os resultados demonstraram que tanto o ELF quanto a TC isolada possuem atividade tripanocida in vitro, apresentando a IC50 de 0,6426 μg/mL e 0,4022 μg/mL, respectivamente. Tais resultados foram considerados promissores quando comparados à IC50 de 9,32 μg/mL do fármaco de referência Bz. Ainda foi observado que o ELF e a TC reduziram em 32% e 51%, respectivamente, o índice de infecção por amastigotas em células H9c2, enquanto o Bz inibiu 36%. Nos experimentos in vivo, foi verificado que tanto o ELF quanto a TC foram capazes de suprimir a parasitemia dos animais experimentalmente infectados pela cepa Y, sendo observada uma potencialização desta atividade quando as LSTs foram combinadas ao Bz, uma vez que o tratamento com ELF+Bz induziu a 70% de cura nos animais, o mesmo índice foi observado no tratamento com Bz em monoterapia. Já a combinação TC+Bz foi capaz de suprimir totalmente a parasitemia e os testes do critério de cura confirmaram um índice de 100% de cura entre os animais submetidos a este tratamento. Através da dosagem de citocinas, foi observado que as terapias combinadas inibiram a produção de IFN-γ e TNF-α, importantes citocinas pró-inflamatórias ligadas à lesão tecidual associada à doença de Chagas, e foi verificado também que animais submetidos aos tratamentos contendo as LSTs apresentaram maiores produções da citocina IL-10, o que sugere uma modulação da resposta imunológica induzida pela atividade anti-inflamatória das LSTs. O benefício da modulação da resposta imune também foi evidenciado pela ausência e/ou redução de miocardite nos animais que receberam o tratamento combinado com ELF+Bz e TC+Bz. De maneira geral, nossos resultados demonstram que o tratamento combinado entre TC e Bz é promissor, pois além de induzir ao índice de cura superior ao Bz em monoterapia, ainda preveniu a miocardite nos animais. Além disso, as LSTs são capazes de interferir na resposta imune do hospedeiro, podendo esta interferência estar relacionada a melhor prognóstico da doença.